Том 25, № 2 (2022)

Вопросы неспецифической иммунопрофилактики случаев заражения новой коронавирусной инфекцией поднимались с момента объявления ВОЗ пандемии COVID-19. В ранее проведенных исследованиях имеются многочисленные упоминания о том, что новая коронавирусная инфекция сопровождается проявлениями аносмии и дисгевзии. Целью данного исследования стало ретроспективное изучение взаимосвязи неспецифической иммунопрофилактики новой коронавирусной инфекции со случаями аносмии/дисгевзии у больных, перенесших COVID-19 на территории Свердловской области в 2020 году.

Изучены клинико-лабораторные данные 84 сотрудников многопрофильного медицинского учреждения, оказывавшего неотложную педиатрическую помощь. Все участники однократно перенесли инфекцию, вызванную SARS-CoV-2. Этиологическая диагностика включала обязательное молекулярно-биологическое исследование биообразцов. Концентрация антител к вирусу определялась с использованием набора реагентов SARS-CoV-2-IgG (АО «Вектор-Бест», г. Новосибирск, Россия). Часть обследованных (41 человек; 48,8% от всех) заявили о проведении по личной инициативе (без консультации с врачом) неспецифической иммунопрофилактической терапии COVID-19 в период объявления пандемии коронавирусной инфекции. С этой целью применялись: колекальциферол, риамиловир, IFNa-2b человеческий рекомбинантный, умифеновира гидрохлорида моногидрат, аскорбиновая кислота, ацетат цинка. У 58 человек (69,0% от всех) течение инфекции осложнялось потерей вкусовой чувствительности и обоняния (группа № 1), у 26 человек (31,0%) изменений вкуса и обоняния не было выявлено (группа № 2). Статистическая обработка полученных данных произведена с использованием пакета STATISTICA v. 12.5.192.5 (StatSoft, Inc., США), изучены базовые статистики, выполнен кластерный анализ.

Применение кластерного анализа позволило установить, что между наблюдениями аносмии/дисгевзии и использованием иммунопрофилактических средств связь существует. В частности, применение IFNa-2b человеческого рекомбинантного является протективным в отношении снижения числа случаев развития осложнения инфекции, в частности аносмии/дисгевзии, вызванной новым коронавирусом. Использование данного препарата показало снижение числа осложнения в 8,5 раза (p = 0,03). Также у пациентов при привентивном интраназальном использовании интерферона отмечалось: снижение длительности госпитализации на 14,3% (p = 0,01), объема поражения тканей легких (p = 0,03), более высокие концентрации IgG к SARS-CoV-2 через 2 месяца после перенесенного заболевания (p = 0,001).

Впервые получены данные о взаимосвязи использования иммунопрофилактических средств с проявлениями аносмии/дисгевзии при COVID-19. Показана протективная роль использования IFNa-2b человеческого рекомбинантного в отношении снижения числа случаев развития осложнения инфекции: аносмии/дисгевзии, степени повреждения легких, а также развития противовирусного гуморального иммунного ответа. Полученные данные могут быть использованы для обоснования клинических рекомендаций по профилактике новых вспышек коронавирусной инфекции. Ограничением полученных результатов может быть необходимость проведения дополнительный исследований на более широкой выборке респондентов.

Массовая вакцинация против SARS-CoV-2 представляется одним из наиболее важных этапов на пути разрешения проблемы пандемии COVID-19, которая за два с половиной года унесла жизни миллионов человек. Для создания анти-COVID-19 вакцин были задействованы как традиционные подходы (инактивированные вакцины), так и инновационные, благодаря чему на рынке появились вакцины на основе нуклеиновых кислот (мРНК-, ДНК-вакцины). Мы сконструировали плазмиду (ДНК-вакцину), кодирующую ген рецептор-связывающего домена (RBD) белка шипа (S) вируса SARS-CoV-2. Данная ДНК-вакцина была названа pVAXrbd. Для упаковки pVAXrbd был использован поликатионный носитель полиглюкин-спермидин (PGS), а также его конъюгат с рекомбинантным белком RBD (PGS-RBD). При добавлении отрицательно заряженной плазмидой ДНК pVAXrbd к поликатионным молекулам PGS или PGS-RBD, происходило формирование комплексов полимеров с плазмидной ДНК путем самосборки за счет нековалентного взаимодействия. Целью данной работы было исследование клеточного ответа, индуцированного ДНК-вакциной в различных вариантах упаковки, а также анализ вклада упаковки в развитие иммунного ответа. Мышам линии BALB/c вводили ДНК-вакцину в трех вариантах: «голую» рVAXrbd; плазмиду pVAXrbd в оболочке PGS; pVAXrbd в оболочке PGS-RBD. В качестве контроля животным вводили рекомбинантный белок RBD. Клеточный ответ оценивали по продукции IFNγ с помощью двух методов – ELISpot и ICS с использованием проточной цитометрией. Было показано, что ДНК-вакцина pVAXrbd как сама по себе, так и в составе комплексов, обладает способностью индуцировать клеточный иммунный ответ. Наиболее эффективный клеточный ответ был обнаружен в группе животных, иммунизированных комплексом pVAXrbd-PGS. С помощью метода ELISpot для этой группы было зарегистрировано наибольшее количество клеток, ответивших выбросом IFNγ на стимуляцию специфическими пептидами; с помощью ICS и проточной цитометрии для этой группы был показан больший процент IFNγ-продуцирующих CD4⁺ и CD8⁺Т-клеток. Этот эффект, по-видимому, связан с тем, что оболочка из полиглюкин-спермидина защищает ДНК от действия нуклеаз, а комплексы pVAXrbd-PGS более эффективно узнаются антигенпрезентирующими клетками, чем голая плазмидная ДНК. Представленные результаты показывают, что оболочка из полиглюкин-спермидина обеспечивает повышение иммуногенности ДНК-вакцины pVAXrbd в отношении вирус-специфического Т-клеточного ответа.

Нейтрофильные лейкоциты играют ключевую роль в поражении суставов при развитии ревматоидного артрита (РА). Процесс специфической гибели этих клеток (нетоз) может быть важным источником происхождения обнаруживаемого в крови пациентов с РА повышенного уровня внДНК. Большой интерес представляет изучение предполагаемой зависимости между содержанием в крови внДНК, способной играть роль аутоантигена и таким образом участвовать в инициации аутоиммунных реакций и показателями активации нейтрофилов при этом иммунопатологическом состоянии. Целью исследования стало определение уровней внДНК в плазме крови пациентов с РА в зависимости от клинических показателей течения заболевания и выявление возможной связи данного показателя с активацией нейтрофильных лейкоцитов. В исследование были включены 63 пациента с РА, находившиеся на стационарном лечении в ревматологическом отделении клиники иммунопатологии НИИФКИ (г. Новосибирск) и 28 условно здоровых доноров. Определение уровня внДНК проводили с помощью флюоресцентного красителя PicoGreen. Нейтрофилы из периферической крови доноров и пациентов с ревматоидным артритом выделяли в двойном градиенте плотности фиколл-урографин. Нейтрофильные лейкоциты составляли более 98% во фракции выделенных клеток, а их жизнеспособность составляла 99%. Часть свежевыделенных нейтрофилов стимулировали добавлением форболмиристат-ацетата (PMA). Концентрацию миелопероксидазы в плазме крови доноров и пациентов с РА определяли с помощью набора Human MPO ELISA kit. Показано, что возрастание концентрации внеклеточной ДНК в плазме крови пациентов с РА происходит параллельно увеличению степени активности заболевания, и данный параметр может служить относительно независимым показателем интенсивности патологического процесса. Выявлены статистически достоверные корреляции уровня внДНК с основными показателями, позволяющими оценивать активность заболевания в клинике: DAS-28 и уровнем С-реактивного белка в сыворотке (p < 0,05). У пациентов с ревматоидным артритом на фоне лечения наблюдается снижение концентрации внДНК в плазме, что может быть связано с положительным прогнозом: снижением клинических проявлений заболевания, а значит, и правильно подобранной терапией. Установлена корреляция между уровнем внДНК и концентрацией миелопероксидазы в крови пациентов с РА. Полученные при исследовании данные говорят о возможной связи повышенной концентрации внеклеточной ДНК с активацией нейтрофильных лейкоцитов при ревматоидном артрите и с усилением нетоза в пораженных суставах.

На сегодняшний день диагностике состояния иммунной системы у пациентов с постковидным синдромом уделяется недостаточно внимания. Влияние вируса SARS-CoV-2 на различные системы организма, в том числе и иммунную, могут способствовать развитию нарушений, приводящих к патологическим процессам. В то же время пациенты, страдающие от осложнений COVID-19, включая госпитализацию и изоляцию от членов своей семьи, испытывают сильный психологический и социальный стресс. Практически в каждом четвертом случае это приводит к развитию постковидного синдрома.

Целью исследования явилось изучить уровень NK-клеток, уровня кортизола и особенностей нарушений иммунной системы у пациентов, перенесших SARS-CoV-2 инфекцию.

Обследовано 78 пациентов через 6 месяцев после перенесенного COVID-19; изучено 25 параметров системы крови (общий анализ крови), 50 параметров иммунной системы, включая Т-лимфоциты, В-лимфоциты и их функциональные маркеры, NK, TNK-клетки, фагоцитарное звено иммунной системы, и гуморальные факторы, включая общие и специфические иммуноглобулины и фрагменты комплемента.

Наши исследования показали резкое, трехкратное снижение количества натуральных киллеров более чем у трети обследованных лиц. Это снижение сопровождается более высоким относительным уровнем Т-лимфоцитов и Т-хелперов, последнее, вероятно, связано с компенсаторным повышением Т-лимфоцитов и нарушением регуляции Т-клеточного звена иммунной системы, что требует более детального исследования и скорее всего изучения цитокинового профиля у таких пациентов. Более того, у части постковидных пациентов сохраняется высокий уровень кортизола, что свидетельствует о сохранении уровня напряженности хронического стресса. Также важным является выявленные изменения в тромбоцитарном звене кроветворения (повышение уровня тромбоцитов и тромбоцитокрита), которые могут приводить к поздним нарушениям системы свертывания крови и образования тромбозов.

В настоящее время, несмотря на широкое употребление понятий «системное воспаление» (СВ) и «системная воспалительная реакция» (СВР), нет общепринятых критериев их верификации. Зачастую эти процессы отождествляют (что методологически неверно) и ассоциируют с повышением провоспалительных медиаторов в крови. Однако СВ – это сложный процесс, который требует интегральных критериев, включающих оценку выраженности СВР (уровней реактивности) и дополнительных феноменов СВ: микротромбообразования, системной альтерации и дистресс-реакции нейроэндокринной системы. При этом возникает необходимость в оценке отдельных показателей СВ в качестве более доступной для медицинской практики альтернативы использования более сложных интегральных показателей. Цель – оценить диагностическую эффективность уровней CRP и IL-6 как маркеров острого и хронического системного воспаления. Для изучения острого СВ были проанализированы данные пациентов с острыми критическими состояниями инфекционного и неинфекционного генеза, для изучения хронического СВ – данные пациентов с аутоиммунными заболеваниями, хронической органной недостаточностью и другими хроническими деструктивными заболеваниями. Выраженность СВР основывалась на расчете интегрального показателя – уровня реактивности (УР). Дифференциация воспалительного процесса на классическое (КВ) и системное воспаление проводилась с помощью ранее предложенной нами шкалы СВ, верификация хронического СВ (ХрСВ) – с помощью шкалы ХрСВ. СВ (или ХрСВ) выявлено во всех группах пациентов, при этом частота регистрации СВ у пациентов с острыми состояниями повышалась при развитии ПОН. Частота развития СВР во всех группах была выше, что подтверждает невозможность отождествления этих процессов. ROC-анализ показал, что уровень CRP обладает неудовлетворительной диагностической эффективностью в отношении развития СВ/ХрСВ (AUC < 0,6), а IL-6 – очень хорошей (AUC 0,8-0,9). Прогностическая ценность маркеров для регистрации феномена СВР была выше, при этом AUC_IL-6 превышала AUC_CRP. Таким образом, IL-6 при многих острых и хронических патологиях по диагностической эффективности более близок к интегральным показателям, чем СRP, а динамика IL-6 в крови может использоваться для прогнозирования и оценки осложнений, связанных с острым и хроническим СВ, а также для назначения и мониторирования результатов антицитокиновой терапии.

Формирование специфического гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 обусловлено образованием нейтрализующих IgG, способных в первую очередь блокировать рецептор-связывающий домен S-белка вируса. К тому же важную роль играет длительность сохранения постинфекционного иммунитета, а также авидность циркулирующих антител. Целью данной работы стала оценка количества антител к S-белку SARS-CoV-2, их авидности и нейтрализующей активности в исследуемой выборке переболевших и вакцинированных серопозитивных лиц.

Была изучена выборка из 113 лиц, сформировавшие три экспериментальные группы: переболевшие, вакцинированные, переболевшие и вакцинированные. Сыворотка крови респондентов была изучена на наличие специфических IgG к SARS-CoV-2 с определением их количества (в BAU/мл) с использованием наборов АО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск, Россия). Индекс авидности определяли с помощью набора производства «МедипалТех» (г. Дубна, Россия). Оценку нейтрализующей способности антител проводили иммуноферментным методом с помощью набора производства «МедипалТех» (г. Дубна, Россия), результатом которого является процент нейтрализованных S-белков, специфичных к RBD.

Средние значения количества IgG в группах «переболевшие» и «вакцинированные» не продемонстрировали значимых отличий, однако оба показателя были достоверно ниже, чем аналогичный показатель группы «переболевшие и вакцинированные». Наблюдалась цикличность изменения количества антител, при этом наиболее интенсивное падение уровня иммуноглобулинов было зарегистрировано за первые четыре месяца после болезни или вакцинации. При изначально равных уровнях показателей в обеих группах, темпы снижения этого показателя в группе «вакцинированные» значительно выше, чем в группе «переболевшие», что позволяет сделать вывод о снижении количества специфических антител в этой группе до нулевых величин уже к 10-му месяцу. В группе «переболевшие и вакцинированные» показатель IgG оставался неизменный за весь срок сбора анамнеза. Индекс авидности антител у вакцинированных лиц был выше, чем у переболевших лиц, при этом в обеих группах данный показатель характеризовался стабильным ростом в рассматриваемом временном интервале от 7 до 11 месяцев. Отмечены наиболее высокие показатели уровня антител и индекса их авидности в группе переболевших и вакцинированных лиц, что определяется наиболее полной активацией иммунной системы. Выявлена прямолинейная тенденция динамики снижения показателя нейтрализующей активности за рассматриваемый временной промежуток. Общая картина полученных результатов свидетельствует о том, что нейтрализующая активность антител в большей степени определяется количеством специфичных к SARS-CoV-2 иммуноглобулинов. Таким образом, выявлена динамика изменения уровня антител к SARS-CoV-2 в различных группах обследуемых лиц, установлена прямая взаимосвязь между нейтрализующей активностью и количеством иммуноглобулинов, а также роль вакцинации в повышении авидности антител.

Приводятся сведения по изучению и применению оптического излучения в различных спектральных диапазонах при лечении заболеваний ЛОР-органов. Рассматриваются отдельные вопросы иммунологических преобразований слизистой оболочки полости носа в ответ на хирургическую альтерацию в ранних сроках послеоперационного периода. С целью повышения эффективности послеоперационной реабилитации пациентов, перенесших ринохирургические вмешательства, в комплексной терапии использована низкочастотная ультразвуковая кавитация в сочетании с фотохромотерапией. Проведена оценка клинико-иммунологической эффективности лечения пациентов, основанная на изучении клинико-функциональной картины, на ранних сроках послеоперационного периода и стабилизации цитокинового профиля. В результате обоснована возможность использования оптического излучения в различных спектральных диапазонах, на основе изучения физических характеристик светового излучения с разъяснением механизмов воздействия на поврежденную слизистую оболочку, для реализации воспалительного ответа на хирургическую травму и восстановления иммунологических отклонений. Работа проведена с целью привлечения научного интереса к немедикаментозным методам ранней реабилитации лиц, перенесших ринохирургические вмешательства.

В последние десятилетия накоплены данные об иммунотропной активности бифидофлоры, основанные на влиянии дано группы бактерий на изолированные лимфоидные фолликулы, дендритные клетки, агрегаты В-клеток, про- и противовоспалительтные цитокины и хемокины, а также участие бифидофлоры в дискриминация «чужеродного материала» при формировании микросимбиоценоза. Актуальность исследований связана не только с фундаментальной проблемой симбиоза человека и микробиоты, но и с перспективой практического применения полученных знаний в направлении создания пробиотиков, влияющих на иммунную систему. В работе приведены результаты исследования влияния супернатанта и бактериальных клеток штамма Bifidobacterium bifidum 791 (B. bifidum 791) на модели мононуклеарных клетки (МНК) периферической крови человека. В работе использовали эталонный штамм B. bifidum 791 (Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ «Генетика», № депонента АС-1247), использующийся при производстве пробиотика «Бифидумбактерин» (ЗАО «Экополис», г. Ковров). МНК выделяли из периферической крови 20 здоровых доноров. Для окрашивания МНК использовали моноклональные антитела CD4, CD8, CD3, CD25, CD69, CD56 (Beckman Coulter, США). Анализ субпопуляционного состава проводили методом многоцветной проточной цитометрии на приборе Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США). Эксперименты проводили в двух повторах. Исследования показали, что пробиотические штаммы обладают активизирующим и модулирующим действием на иммунокомпетентные клетки. Исследуемый штамм B. bifidum 791 оказывал иммуномодулирующее действие на клетки неспецифического и адаптивного иммунитета: увеличивал % CD69⁺ клеток в субпопуляции CD3⁺CD8⁺Т-лимфоцитов, CD69 (%) и CD25 (%) NK-клетками, а также усиливал активацию цитотоксических лимфоцитов. Супернатант бифидобактерий оказывал более выраженное влияние на МНК (увеличивает экспрессию CD69 Th-клетками, индуцировал экспрессию CD25 Т-цитотоксическими клетками и увеличивал экспрессию CD69 (%) и CD25 (%) NK-клетками), в сравнении с бактериальными клетками B. bifidum 791. Полученные данные способствуют пониманию механизмов иммунорегуляторного влияния нормобиоты (на модели бифидобактерий) при формировании симбиотических взаимодействий «микробиота – хозяин» и вносят вклад в развитие нового направления – «инфекционная симбиология». Дальнейшее исследование иммуномодулирующей активности бифидофлоры имеет перспективу развития в направлении поиска и отбора штаммов бифидобактерий с целью создания новых пробиотических препаратов таргетного действия.

В настоящее время активно ведутся экспериментальные исследования по изучению влияния низкомолекулярных медиаторов полипептидной природы на иммунную систему с целью направленного конструирования новых иммуномодулирующих лекарственных средств. В то же время остается недостаточно изученным вопрос о специфическом влиянии отдельных групп пептидов на иммунную систему экспериментальных животных и их потомства, что делает актуальным исследования в данном аспекте. В работе была проведена оценка влияния пептида – гомолога фрагмента АКТГ_15-18 (лабораторный шифр КК1) на иммунологические показатели беременных крыс и их потомства на модели воздействия пассивного табакокурения.

Исследованы иммунологические показатели у 96 беременных крыс Вистар массой 200-300 г, подвергшихся пассивному табакокурению и получавших синтетический пептид КК1, являющийся структурным аналогом последовательности фрагмента АКТГ_15-18 (Acetyl-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-amide), а также у их потомства на 14-й день от рождения (76 крысят). Опытные крысы подвергались фумигации табачным дымом по 8 часов ежедневно с 1-го по 20-й день беременности. Синтетический пептид КК1 беременным крысам вводили в виде водного раствора в дозе 40 мкг/кг, через день, один раз в сутки на протяжении 10 дней, начиная со второй недели беременности.

У всех животных определялись масса тела, тимуса и селезенки, количество лейкоцитов, тимоцитов, спленоцитов, миелокариоцитов, циркулирующих иммунных комплексов определяли в соответствии с лабораторными методами исследования экспериментальных животных. Статистическая обработка проводилась с помощью непараметрических методов. Группы сравнивали с помощью U-критерия Манна–Уитни с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows v. 9.0, StatSoft Inc. Различия считали достоверными при р < 0,05.

Введение пептида КК1 как контрольным, так и опытным беременным крысам сопровождалось разнонаправленными изменениями количества клеток в лимфоидных органах. В основе положительной тенденции сдвигов иммунологических параметров при воздействии пептида КК1 лежит возможное снижение последствий токсического действия табачного дыма за счет противовоспалительного эффекта данного препарата, а также его способности к ограничению развития свободно-радикальных реакций. Показано, что изучаемый пептид способствует положительной динамике ряда иммунологических параметров у экспериментальных животных, подвергнутых пассивному курению. Целесообразным является дальнейшее изучение механизмов иммунотропного действия пептидов- гомологов фрагмента АКТГ_15-18.