Optimization of rhBMP-2 active-form production in a heterologous expression system using microbiological and molecular genetic approaches


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Recombinant bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) has pronounced osteoinductive properties, as evidenced by the results of experimental and clinical practices. This applies to both the protein produced in eukaryotic cells and the protein synthesized in bacterial cells. In eukaryotic expression systems, production of the protein is extremely low and, consequently, the cost of materials on its basis is very high. Therefore, optimization of heterologous expression systems for rhBMP-2 production represents an important task. In the present work, optimization of codon composition of the rhBMP-2 gene nucleotide sequence and secondary structure of the transcript, as well as strain selection for efficient gene expression, were carried out. The producing strain based on Escherichia coli BL-21(DE3) provides a high level of rhBMP-2 synthesis (about 57% of total cell proteins). Biological activity of rhBMP-2 dimeric forms purified from the obtained producing strain was measured by induction of alkaline phosphatase activity in C2C12 cells. It is comparable with that of commercial rhBMP-2 expressed in E. coli (R&D Systems, United States). Purified rhBMP-2 does not contain impurities of E. coli endotoxin and can be used in experimental studies of osteoinduction in laboratory animals.

Об авторах

A. Karyagina

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology; Belozersky Research Institute of Physico-Chemical Biology; All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology

Автор, ответственный за переписку.
Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 119991; Moscow, 127550

I. Boksha

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

T. Grunina

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

A. Demidenko

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

M. Poponova

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

O. Sergienko

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology; All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 127550

A. Lyaschuk

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

Z. Galushkina

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

L. Soboleva

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

E. Osidak

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology; Imtek Ltd.

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 121552

A. Semikhin

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

A. Gromov

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

V. Lunin

Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology; All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology

Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 127550

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Allerton Press, Inc., 2016

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».