Культивирование и криохранение индуцированных регуляторных Т-клеток человека

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель исследования — определение возможности продолжительного культивирования, а также криохранения культуры индуцированных регуляторных Т-клеток (иТрег) человека. Методы: CD4+ T-клетки выделяли из мононуклеаров периферической крови человека с помощью магнитной сепарации. Индукцию фенотипа Трег проводили путем добавления TGF-β, IL‑2, а также антител против CD3 в среду RPMI‑1640. Количество клеток с фенотипом CD4+CD25+CD127low анализировали с помощью проточной цитометрии непосредственно после выделения, на 7, 14 и 21-е сутки культивирования, а также после криохранения. Экспрессия генов, кодирующих ключевые маркеры Трег, была исследована методом тотального секвенирования РНК. Результаты: На 7, 14 и 21-е сутки культивирования CD4+ клеток в питательной среде RPMI c добавлением TGF-β, IL‑2 и антител против СD3, количество клеток с фенотипом CD4+CD25+CD127low было достоверно больше, чем при выделении, и в среднем составляло 96.3±2.5%. После криохранения количество CD4+CD25+CD127low клеток в культуре достоверно не менялось по сравнению с культивированием. В культуре иТрег была показана стабильная экспрессия маркеров Трег CD4, IL2R, FOXP3, IKZF2 на уровне генов. Выводы: иТрег сохраняют фенотипическую стабильность в культуре на протяжении 21 суток, а также после криохранения.

Об авторах

Л. А Ржанова

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: 9303923@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-4082-7662
Москва, Российская Федерация

Е. В Кузьменко

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН; Московский физико-технический институт

Email: katya.3734@gmail.com
ORCID iD: 0009-0003-3601-1588
Москва, Российская Федерация; Долгопрудный, Российская Федерация

Д. Д Жданов

Институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича

Email: zhdanovdd@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-4753-7588
Москва, Российская Федерация

З. Р Стариннов

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: zakhar3600@gmail.com
ORCID iD: 0009-0001-0233-2231
Москва, Российская Федерация

М. А Мачинская

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: maria.machinsky@gmail.com
ORCID iD: 0009-0006-3213-7564
Москва, Российская Федерация

А. С Рябченко

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: anfisafil@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-4998-1367
Москва, Российская Федерация

А. А Рябинин

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: andrey951233@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-7337-1166
Москва, Российская Федерация

А. А Пермякова

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН; Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: dex.winner@gmail.com
ORCID iD: 0009-0009-1821-3454
Москва, Российская Федерация; Москва, Российская Федерация

О. Л Черкашина

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: olgalcher@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-6798-9365
Москва, Российская Федерация

Е. А Воротеляк

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН; Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: vorotelyak@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-5405-0212
Москва, Российская Федерация

Е. И Моргун

Институт биологии развития имени Н.К. Кольцова РАН

Email: lady.morgun2016@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-9082-6206
Москва, Российская Федерация

Список литературы

  1. Blinova V.G., Sakhno L.V., Ponomarev E.D., Dukhanin A.S., Sharova N.I., Yarygin K.N. Phenotypical and functional characteristics of human regulatory T-cells during ex vivo maturation from CD4+ T-lymphocytes. Appl Sci (Basel). 2021; 11(13): 5776.
  2. Blinova V.G., Sakhno L.V., Ponomarev ED., Askarova S.A., Yarygin K.N. Increased suppressor activity of transformed ex vivo regulatory T-cells in comparison with unstimulated cells of the same donor. Biomed Khim. 2022; 68(1): 55–67.
  3. Blinova V.G., Zhdanov D.D. Many Faces of Regulatory T-Cells: Heterogeneity or Plasticity? Cells. 2024; 13(11): 959.
  4. Bluestone J.A., Buckner J.H., Fitch M., Gitelman S.E., Gupta S., Hellerstein M.K., et al. Type 1 diabetes immunotherapy using polyclonal regulatory T-cells. Sci Transl Med. 2015; 7(315): 315ra189.
  5. Chen W., Jin W., Hardegen N., Lei K.J., Li L., Marinos N., et al. Conversion of Peripheral CD4+CD25- Naive T-Cells to CD4+CD25+ Regulatory T-Cells by TGF-β Induction of Transcription Factor Foxp3. J Exp Med. 2003; 198(12): 1875–86.
  6. Deng G., Song X., Greene M.I. FoxP3 in Treg cell biology: a molecular and structural perspective. Clin Exp Immunol. 2020; 199(3): 255–62.
  7. Gołąb K., Grose R., Plociniczak M., Plewka K., Czerw A., Szyk A., et al. Cell banking for regulatory T cell-based therapy: strategies to overcome the impact of cryopreservation on the Treg viability and phenotype. Oncotarget. 2018; 9(11): 9728–40.
  8. Guo W., Wang P., Liu Z., Yang A. Regulatory T-cells in GVHD Therapy. Front Immunol. 2021; 12: 697854.
  9. Lam A.J., Lin D.T.S., Gillies J.K., Uday P., Pesenacker A.M., Kobor M.S., et al. Helios is a marker, not a driver, of human Treg stability. Eur J Immunol. 2022; 52(1): 75–84.
  10. Marson A., Kretschmer K., Frampton G.M., Jacobsen E.S., Polansky J.K., MacIsaac K.D., et al. Foxp3 occupancy and regulation of key target genes during T-cell stimulation. Nature. 2007; 445(7130): 931–5.
  11. Morgun E.I., Osipova I.K., Blinova V.G., Sakhno L.V., Ponomarev E.D. Mini-Review: Tregs as a Tool for Therapy- Obvious and Non-Obvious Challenges and Solutions. Cells. 2024; 13(20): 1680.
  12. Nayer B., Miao T., Wang Y., Wang X., Wang C., Wang X., et al. Local administration of regulatory T-cells promotes tissue healing. Nat Commun. 2024; 15(1): 7863.
  13. Riabinin A.A., Zhdanov D.D., Blinova V.G. Improvement of Treg Selectivity and Stability for Diabetes Mellitus Type 1 Treatment: Complex Approach for Perspective Technologies. Cells. 2025; 14(22): 1803.
  14. Sakaguchi S., Yamaguchi T., Nomura T., Ono M. Regulatory T-cells and Immune Tolerance. Cell. 2008; 133(5): 775–87.
  15. Takatori H., Kawashima H., Matsuki A., Meguro K., Tanaka S., Iwamoto T., et al. Helios Enhances Treg Cell Function in Cooperation With FoxP3. Arthritis Rheumatol. 2015; 67(6): 1491–502.
  16. Veldhoen M., Hocking R.J., Atkins C.J., Locksley R.M., Stockinger B. TGFβ in the Context of an Inflammatory Cytokine Milieu Supports De Novo Differentiation of IL 17-Producing T-cells. Immunity. 2006; 24(2): 179–89.
  17. Weingartner E., Golding A. Direct control of B-cells by Tregs: An opportunity for long-term modulation of the humoral response. Cell Immunol. 2017; 318: 8–16.
  18. Wu Y., Borde M., Heissmeyer V., Feuerer M., Lapan A.D., Stroud J.C., et al. FOXP3 Controls Regulatory T-Cell Function through Cooperation with NFAT. Cell. 2006; 126(2): 375–87.
  19. Yang H., Liu Y., He S., Zeng L., Xiao C., Liu Y., et al. Adoptive therapy with amyloid-β specific regulatory T-cells alleviates Alzheimer’s disease. Theranostics. 2022; 12(18): 7668–80.
  20. Yu W., Li D., Lu H., Feng Y., Che J. Coexpression of Helios in Foxp3+ Regulatory T-Cells and Its Role in Human Disease. Dis Markers. 2021; 2021: 5574472.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Российская академия наук, 2025

Согласие на обработку персональных данных

 

Используя сайт https://journals.rcsi.science, я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных») даю согласие на обработку персональных данных на этом сайте (текст Согласия) и на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика» (текст Согласия).