Galactofuranans and Galactomannan of Cell Walls as Chemotaxonomic Characteristics of the Genus and Species of Clavibacter

Full Text

Принятые сокращения: HSQC — протон-детектированная гетероядерная одноквантовая корреляция; ROESY — двумерная спектроскопия ядерного эффекта Оверхаузера во вращающейся системе координат; TOCSY — тотальная корреляционная спектроскопия; HMBC — гетероядерная корреляция через несколько связей; δ_С, δ_Н — значения химических сдвигов атомов ¹³C и ¹H, соответственно.

Представители рода Clavibacter (семейство Microbacteriaceae, класс Actinomycetes) — аэробные коринеформные бактерии, характеризующиеся пептидогликаном В2_g-типа на основе 2,4-диаминомасляной кислоты и преобладающим менахиноном МК-9 в составе дыхательной цепи (Saddler, Kerr, 2012). В настоящее время род включает восемь валидно описанных видов: C. michiganensis, C. capsici, C. californiensis, C. insidiosus, C. nebraskensis, C. sepedonicus, C. tessellarius, C. zhangzhiyongii (https://lpsn.dsmz.de/genus/clavibacter, 2023). Все виды, за исключением C. capsici и C. сaliforniensis, являются патогенами сельскохозяйственных культур, из них три вида (C. michiganensis, C. insidiosus и C. sepedonicus) — карантинные (Eichenlaub, Gartemann, 2011; Saddler, Kerr, 2012; https://www.eppo.int/ACTIVITIES/plant_quarantine/A2_list, 2022).

Гликополимеры клеточных стенок, ковалентно связанные с пептидогликаном и расположенные на поверхности клетки, играют важную роль в различных жизненных процессах микробной клетки (Brown et al., 2013; Guérin et al., 2022). Гликополимеры бактерий, ассоциированных с высшими организмами, привлекают внимание исследователей в связи с их участием в процессах колонизации и инфицировании организма-хозяина (Schade, Weidenmaier, 2016). Изучение особенностей строения и компонентного состава гликополимеров важны для понимания их физиологических функций и биологических свойств, выяснения молекулярных механизмов взаимодействия бактерий с клетками макроорганизма, разработки методов борьбы с патогенами (Schade, Weidenmaier, 2016; Guérin et al., 2022). Изучение состава и структур гликополимеров микробного происхождения представляет также интерес для ряда областей фундаментальной науки, в частности, органической химии, микробиологии, эволюции и систематики микроорганизмов.

В настоящее время в основе системы классификации прокариот лежат данные сравнительного анализа геномов, однако информация о фенотипических характеристиках, в том числе хемотаксономических, по-прежнему актуальна (Chun et al., 2018; Nouioui et al., 2018). Хемотаксономические признаки, такие как “дифференцирующие сахара целых клеток” и “состав сахаров клеточной стенки”, отражающие, в том числе состав структурных компонентов гликополимеров клеточной стенки, используются в систематике различных групп актиномицетов с 60-х годов прошлого столетия (Cummins, 1962; Lechevalier, Lechevalier, 1970; Goodfellow, Jones, 2012). Для видов рода Clavibacter в качестве диагностических сахаров клеточных стенок указывались, в частности, галактоза, манноза, рамноза и фукоза (Davis et al., 1984). Было также показано, что типы гликополимеров клеточных стенок актиномицетов (тейхоевые, тейхуроновые и тейхулозоновые кислоты, арабиногалактаны и другие кислые или нейтральные полисахариды), их комбинации и структуры могут быть специфичными для таксонов разного ранга (Takeuchi et al., 1990; Potekhina et al., 2011; Тульская и соавт., 2011; Evtushenko, Ariskina, 2012; Goodfellow, Jones, 2012; Nouioui et al., 2018; Шашков и соавт., 2020).

Наши предыдущие исследования клеточных стенок бактерий рода Clavibacter (C. michiganensis, C. tessellarius, C. phaseoli) и представителей потенциально новых видов этого рода показали, что все они содержали по два бесфосфатных гликополимера (галактоманнан и галактофуранан), при этом структуры галактофурананов были уникальны и различались у представителей разных видов (Kim et al., 2021, Shashkov et al., 2021; Perepelov et al., 2023a, 2023b).

Целью настоящей работы было установление состава и структур гликополимеров клеточных стенок типовых штаммов двух ранее не исследованных видов рода Clavibacter — С. insidiosus и C. nebraskensis и оценка таксономической значимости признака “состав и структура гликополимеров клеточных стенок” для бактерий этого рода.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Использованные в работе типовые штаммы C. insidiosus ВКМ Ас-1402^Т и C. nebraskensis ВКМ Ас-1404^Т получены из Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ) (www.vkm.ru). Культуры выращивали аэробно при перемешивании в течение суток (до середины логарифмической фазы роста) при 28 на пептонно-дрожжевой среде (ПДС) (г/л): пептон — 5; дрожжевой экстракт — 3; глюкоза — 5, KH₂PO₄ — 0.2; рН 7.2). Клеточные стенки получали методом дифференциального центрифугирования. После разрушения на ультразвуковом дезинтеграторе клетки обрабатывали 2% раствором додецилсульфата натрия — SDS (при 100, 10 мин), многократно отмывали дистиллированной водой и лиофилизировали. Выделение гликополимеров из клеточных стенок осуществляли методами экстракции 10%-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУ) при 2‒4 (“холодная экстракция”) и экстракции 5% ТХУ при 90 (“горячая экстракция”) (Kim et al., 2021).

Очистку и изучение полимеров химическими и ЯМР-спектроскопическими методами проводили, как описано ранее (Kim et al., 2021). Продукты кислотного гидролиза (2 М HCl, 100, 3 ч) клеточных стенок и гликополимеров, а также абсолютную конфигурацию моносахаридов определяли методами хроматографии и электрофореза на бумаге и методами ГЖХ (Kim et al., 2021).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В гидролизатах клеточных стенок обоих штаммов был выявлен одинаковый состав моносахаридов: галактоза (Gal), манноза (Man), фукоза (Fuc), рамноза (Rha), глюкозамин (GlcN) и следовые количества глюкозы (Glс). У штамма C. insidiosus ВКМ Ac-1402Tобнаружены дополнительно следы рибозы (Rib). Клеточные стенки всех штаммов также содержали пировиноградную кислоту. Фосфатсодержащие соединения не были обнаружены (метод электрофореза) ни в продуктах кислотного гидролиза клеточных стенок штаммов, ни в выделенных из них препаратах гликополимеров.

Методами ГЖХ в кислотных гидролизатах препаратов гликополимеров обоих организмов, полученных методом “холодной экстракции”, выявлен одинаковый состав моносахаридов: Gal, Fuc, Rha и GlcN. Моносахаридный состав препаратов, полученных методом “горячей экстракции”, включал дополнительно Man.

Установлено, что Rha имела L-конфигурацию, а остальные моносахаридные компоненты полимеров (Gal, Man, Fuc и GlcN) были в D-конфигурации.

Полученные данные указывали на присутствие в клеточной стенке каждого из исследованных организмов, по крайней мере, двух бесфосфатных гликополимеров, различных по составу.

Дальнейшее изучение структур гликополимеров клеточных стенок изучаемых актинобактерий осуществляли химическими и ЯМР-спектроскопическими методами, как описано ранее (Kim et al., 2021).

Спектр ¹³C ЯМР (рисунок, табл. 1) препарата “холодной экстракции” из штамма ВКМ Ас-1402Т был типичным для полисахарида с регулярно повторяющимся звеном. Этот спектр содержал пять сигналов примерно одинаковой интегральной интенсивности в аномерной области атомов углерода δ_С 100–110 м. д., два сигнала от 6-дезоксисахаров (16.5 и 17. 9 м. д.) и сигнал от CH₃-группы N-ацетила при 23.5 м. д. Остальные сигналы были расположены в области δ_С 57–86 м. д.

 

Рисунок. Спектр 13С ЯМР препарата “холодной экстракции” из клеточной стенки C. insidiosus ВКМ Ас-1402T. Арабские цифры в номерах относятся к атомам углерода в остатках, обозначенных заглавными буквами в табл. 1

 

Таблица 1. Химические сдвиги ¹³С и ¹H ЯМР (δ_C TSP^а–1.6 м. д. и ¹H δ_H TSP 0.0 м. д.) галактофурананов из клеточных стенок C. insidiosus ВКМ Ас-1402^T и C. nebraskensis ВКМ Ac-1404^T

Остатки	C-1 H-1	C-2 H-2	C-3 H-3	C-4 H-4	C-5 H-5	C-6 H-6 (H-6,6′)
→6)-β-Galf-(1→	109.1 5.07	80.6 4. 24	78.1 4.06	83.4 4.18	70.7 3.99	70.5 3.86, 3.64
→6)-β-Galf-(1→ 3) ↑	109.6 5.04	82.4 4.10	85.4 4.05	84.5 3.98	71.0 3.95	70.5 3.86, 3.64
α-Fucp-(1 3) ↑	100.8 4.99	68.5 3.89	78.9 3.89	73.1 3.87	68.4 4.17	16.5 1.21
α-Rhap-(1 3) ↑	103.5 5.00	71.1 4.26	81.3 3.91	72.3 3.52	70.5 3.81	17.9 1.27
β-GlcpNAc-(1	103.8 4.72	57.1** 3.73	75.0 3.57	71.3 3.47	77.1 3.45	62.1 3.90, 3.75
***α-L-Rhap-(1→(3С)	103.5 5.00	71.1 4.06	72.2 3.85	73.3 3.43	70.1 3.82	17.9 1.27

* TSP — натриевая соль 3-(триметилсилил)-2,2,3,3-тетрадейтеропропионовой кислоты.

** CH₃CON при δ_C 23.5 м.д. (CH3) и 176.2 м. д.; (CO) и δ_H 2.03 м. д.

*** Для C. nebraskensis ВКМ Ac-1404^T (терминальный остаток дисахарида: α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→).

 

¹H ЯМР-спектр этого препарата также содержал пять сигналов в аномерной области δ_Н 4.7–5.1 м. д., два дублета от 6-дезоксисахаров (δ_Н 1.24 и 1.28 м. д., J_5,6 6 Гц) и сигналы от N-ацетильной группы при 2.05 м. д.

Анализ ¹H,¹H COSY, TOCSY и ROESY спектров (не приведены) выявил присутствие двух остатков β-галактофуранозы (β-Galf, остатки A и B), α-фукопиранозы (α-Fucp, остаток C), α-рамнопиранозы (α-Rhap, остаток D) и N-ацетилглюкозамин (β-GlcpNAc, остаток E).

Заключение о составе моносахаридов, их пиранозной или фуранозой конфигурации, а также аномерной конфигурации гликозидного центра были сделаны на основании сравнения видимых констант спин-спинового взаимодействия и химических сдвигов остатков сахаров и соответствующих пираноз (Altona, Haasnoot, 1980; Janson et al., 1989) и фураноз (Angyal, 1979; Syr, Perlin, 1979; Bock, Pedersen, 1983).

При сравнении ¹³С ЯМР и ¹H ЯМР спектров препарата штамма ВКМ Ас-1402^Т с соответствующими спектрами штамма ВКМ Ас-1403^Т, изученного ранее (Kim et al., 2021), было выявлено их полное соответствие (химические сдвиги атомов ¹³С и ¹Н для штамма ВКМ Ас-1402^Т приведены в табл. 1 и на рисунке). Полученные данные свидетельствовали о сходстве структур полисахарида штамма ВКМ Ас-1402^Т с изученным ранее галактофурананом C. michiganensis ВКМ Ас-1403^Т (Kim et al., 2021).

Спектры ¹³C ЯМР (табл. 1, рисунок) были расшифрованы с использованием двумерного спектра ¹H,¹³C HSQC. Анализ спектра ¹H,¹³C HSQC выявил положение замещения в остатках сахаров на основании их 13C химических сдвигов по сравнению с таковыми для исходных пираноз и фураноз (Bock, Pedersen, 1983). Остатки β-Galf были замещены по положению 6 (А, δ_C-6 70.5) и 3,6 (B, δ_C-3 85.4 и δ_C-6 70.5, соответственно), остатки α-Fucp по положению 3 (C, δ_C-3 78.9), остатки α-Rhap по положению 3 (D, δ_C-3 81.3) и остатки β-GlcpNAc (E) являлись терминальными для галактофуранана из штамма ВКМ Ас-1402^Т. Последовательность остатков в полимерной цепи была доказана при анализе спектра ¹H,¹H ROESY (табл. 1), где наблюдались корреляционные пики δ_H/δ_H между остатками: Н-1(A)/Н-6′(B) (5.07/3.64), Н-1(B)/ Н-6′(A) (5.04/3.64), Н-1(C)/Н-3(B) (4.99/4.05), Н-1(D)/Н-3(C) (5.00/3.89), и Н-1(E)/Н-3(D) (4.72/3.91). Эта последовательность была подтверждена при анализе спектра ¹H,¹³C HMBC (табл. 1), где выявлены следующие корреляционные пики δ_H/δ_С между остатками H-1(A)/C-6(B) (5.07/70.5), H-1(B)/C-6(A) (5.04/70.5), H-1(C)/C-3(B) (4.99/85.4), H-1(D)/C-3(C) (5.00/78.9) и H1(E)/C-3(D) (4.72/81.3).

Приведенные данные свидетельствуют о том, что галактофуранан из клеточной стенки ВКМ Ас-1402^Т имел структуру, близкую к описанной ранее у C. michiganensis ВКМ Ас-1403^Т (Kim et al., 2021). Однако эти два полимера различаются положением гликозидной связи между остатками рамнозы (D) и фукозы (С) в трисахаридном заместителе: у штамма ВКМ Ас-1402^Т связь 1→3, а у штамма C. michiganensis ВКМ Ас-1403^Т связь 1→2.

Таким образом, повторяющееся звено галактофуранана из штамма ВКМ Ас-1402^Т можно представить следующим образом:

A B

→6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-Galf-(1→

E D C

β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1

→

3)

Сравнение ¹³С ЯМР и ¹H ЯМР спектров препаратов “холодной экстракции” из штамма ВКМ Ас-1404^Т (второго исследованного штамма) с соответствующими спектрами штамма ВКМ Ас-1402^Т показало их сходство. Однако на двумерных спектрах ¹H,¹³C HSQC, ¹H,¹H ROESY и ¹H,¹³C HMBC препарата штамма ВКМ Ac-1404^T были обнаружены дополнительные сигналы, которые расшифрованы как принадлежащие терминальным остаткам рамнопиранозы D_t (табл. 1) в боковом дисахариде α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→. Дисахарид замещает каждый второй остаток галактофуранозы в интегральной цепи, чередуясь с вышеописанным (для галактофуранана штамма ВКМ Ас-1402^Т) трисахаридом.

Таким образом, повторяющееся звено галактофуранана из штамма ВКМ Ac-1404^T можно представить следующим образом:

A B A B

→6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-Galf-(1→

3) 3)

E D C Dt C

β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1 α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1

Результаты исследований препаратов “горячей экстракции” из клеточных стенок штаммов ВКМ Ас-1402^Т и ВКМ Ac-1404^T с использованием ранее описанных методов и подходов (Kim et al., 2021) показали присутствие, помимо галактофурананов, описанных выше, пируватсодержащего галактоманнана. Структура галактоманнана обоих штаммов была полностью идентична галактоманнану из клеточной стенки C. michiganensis ВКМ Ас-1403^Т (Kim et al., 2021):

F G H

→3)-α-D-Galp-(1→3)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→

4) 6)

\ /

S-Pyr

В результате проведенного исследования установлены структуры гликополимеров клеточных стенок типовых штаммов видов рода Clavibacter — C. insidiosus и C. nebraskensis. Оба штамма содержали по два гликополимера нейтральной и кислой природы.

Первый, нейтральный полимер C. insidiosus ВКМ Ас-1402^Т, представляет собой (1→6)-связанный β-D-галактофуранан, каждый второй остаток которого несет боковой трисахарид, β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→. Этот полимер отличается от галактофуранана C. michiganensis ВКМ Ac-1403^T, структура которого опубликована ранее (Kim et al., 2021), (1→3)-локализацией гликозидной связи между остатками рамнозы и фукозы в боковом трисахаридном заместителе. Нейтральный гликополимер C. nebraskensis ВКМ Ас-1404Тимеет структуру кора и боковой трисахарид, идентичные таковым у C. insidiosus ВКМ Ас-1402^Т, но отличается присутствием дополнительного дисахаридного заместителя α-L-Rhap-(1→3)-α-D- -Fucp-(1→, который чередуется с трисахаридом.

Положение (1→3)-гликозидной связи между остатками рамнозы и фукозы в боковом остатке трисахарида, а также наличие боковых дисахаридных заместителей на основной цепи галактофуранана указывает на новые детали структуры, не описанные ранее для Clavibacter и других грамположительных бактерий (http://csdb.glycoscience.ru/, 2022).

Второй гликополимер клеточных стенок исследованных штаммов –пируватсодержащий галактоманнан с повторяющимся звеном →3)-α-D-Galp-(1→3)-α--D-[4,6-S-Pyr]-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→. Полимер с такой структурой был впервые идентифицирован у C. michiganensis ВКМ Ac-1403T(Kim et al., 2021) и к настоящему времени описан только у представителей рода Clavibacter (http://csdb.glycoscience.ru/, 2022). Хотя методами ЯМР-спектроскопии не удалось определить присутствие пируватсодержащего галактоманнана у C. phaseoli ВКМ Ас-2641Т(вероятно, из-за его незначительного количества) (Perepelov et al., 2023б), химическими методами был обнаружен его компонент (пировиноградная кислота) в составе препарата “горячей экстракции”, полученного из клеточных стенок штамма при повторных выращиваниях (Тульская Е. М., неопубликованные данные).

Сравнительный анализ гликополимеров, идентифицированных в настоящей работе и ранее у представителей разных видов Clavibacter (табл. 2), показал, что (1→6)-связанные β-D-галактофурананы (с одинаковой структурой кора и различными боковыми олигосахаридными заместителями), а также пируватсодержащий галактоманнан (несущий в ряде случаев О-ацетильные группы), присутствуют в составе клеточных стенок организмов всех 7 изученных видов Clavibacter. Помимо типовых штаммов признанных видов, в это число входят штаммы ВКМ Ас-1371 и ВКМ Ас-1372 — представители двух пока не описанных новых видов (Starodumova et al., 2018).

 

Таблица 2. Гликополимеры клеточных стенок некоторых штаммов рода Clavibacter

Штаммы ВКМ	Гликополимеры
	ГФ 1	ГФ 2	ГФ 3	ГФ 4	ГФ 5	ГФ 6	ГМ
C. insidiosus Ac-1402T	♦
C. michiganensis Ac-1403T		♦
C. nebraskensis Ac-1404T			♦
C. tesselarius Ac-1406T				♦			O-Ac
C. phaseoli Ac-2641T					♦		*
Clavibacter sp. Ac-1371						♦
Clavibacter sp. Ac-1372						♦	O-Ac

Примечание. (♦) — ГФ, галактофуранан, () — ГМ, галактоманнан.

ГМ: →3)-α-D-Galp-(1→3)-α-D-[4,6-S-Pyr]-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→ (Kim et al., 2021);

ГФ 1: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-[β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→3)]-Galf-(1→ (настоящая работа);

ГФ 2: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-[β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→2)-α-D-Fucp-(1→3)]-Galf-(1→ (Kim et al., 2021);

ГФ 3: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-[β-D-GlcpNAc-(1→3)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→3)]-Galf-(1→6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-[α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Fucp-(1→3)]-Galf-(1→ (настоящая работа);

ГФ 4: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-{α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Galp-(1→2)-α-D-[α-L-Rhap-(1→3)]- Fucp-(1→2)}-Galf-(1→ (Perepelov et al., 2023a);

ГФ 5: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-{α-D-Manp-(1→2)-α-D-[α-D-Manp-(1→3)]-Ribf-(1→2)}-Galf-(1→ (Perepelov et al., 2023б);

ГФ 6: →6)-β-D-Galf-(1→6)-β-D-[α-D-Manp-(1→2)-α-D-Ribf-(1→2)]-Galf-(1→ (Shashkov et al., 2021).

* Наличие пируватсодержащего галактоманнана в минорных количествах предполагается на основании обнаружения его компонента (пировиноградной кислоты) химическими методами.

 

Полученные в настоящей работе результаты согласуются с ранее высказанным предположением о том, что пируватсодержащий галактоманнан и галактофурананы с олигосахаридными боковыми заместителями специфичны для представителей рода Clavibacter. С другой стороны, структуры галактофурананов с ди-, три- или тетрасахаридными заместителями различного состава и структуры могут служить диагностическими признаками видов.

Клеточные стенки всех исследованных в этой работе и ранее штаммов содержали галактозу, маннозу, глюкозу (следовые количества); у некоторых штаммов дополнительно обнаружены фукоза, рамноза, глюкозамин и рибоза. Наши результаты для C. michiganensis, C. insidiosus, C. nebraskensis и C. tesselarius в целом совпадают с данными, приведенными для этих видов в работе Davis et al. (1984). Однако у отдельных штаммов нами были дополнительно выявлены глюкозамин и рибоза (табл. 3).

 

Таблица 3. Сахара клеточных стенок изученных штаммов рода Clavibacter

Сахара в гидролизатах клеточной стенки*
Штаммы	Gal	Man	Fuc	Rib	Rha	GlcN	Ссылка
C. insidiosus ВКМ Ac-1402T	+	+	+	(+)	+	+	Н.р.
C. nebraskensis ВКМ Ac-1404T	+	+	+	–	+	+	Н.р.
C. michiganensis ВКМ Ac-1403T	+	+	+	–	+	+	Kim et al., 2021
C. tesselarius ВКМ Ac-1406T	+	+	+	–	+	–	Perepelov et al., 2023а
C. phaseoli ВКМ Ac-2641T	+	+	–	+	–	–	Perepelov et al., 2023b
Clavibacter sp. ВКМ Ac-1371	+	+	–	+	–	–	Shashkov et al., 2021
Clavibacter sp. ВКМ Ac-1372	+	+	–	+	–	–	Shashkov et al., 2021

Примечание. “+” — присутствует; “–” — отсутствует; (+) — следовые количества; н. р. — настоящая работа.

* У всех штаммов обнаруживается также глюкоза в следовых количествах.

 

Таким образом, в результате проведенных исследований получены новые данные о химическом составе клеточных стенок типовых штаммов видов C. insidiosus и C. nebraskensis. Сравнительный анализ гликополимеров клеточных стенок всех изученных к настоящему времени представителей Clavibacter показал, что состав и структуры гликополимеров и их структурные компоненты (определяемые в кислотных гидролизатах клеточных стенок) специфичны для рода и видов Clavibacter и могут служить их хемотаксономическими маркерами. Полученные данные могут быть востребованы в таксономических исследованиях и работах по выяснению молекулярных механизмов взаимодействия бактерий с клетками растений. Изучение галактофурананов как небелковых адгезинов, а также путей их биосинтеза, может представлять интерес для разработки средств борьбы с фитопатогенами рода Clavibacter.

ФИНАНСИРОВАНИЕ РАБОТЫ

Исследование выполнено при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (Cоглашение № 075–15–2021–1051) и в рамках темы научного проекта государственного задания МГУ № 121032300094–7.

СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ

Настоящая статья не содержит результатов исследований с использованием животных в качестве объектов.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

About the authors

E. M. Tulskaya

Moscow State University

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Moscow

D. Kim

Moscow State University

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Moscow

N. V. Potekhina

Moscow State University

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Moscow

A. S. Shashkov

Zelinsky Institute of Organic Chemistry, Russian Academy of Sciences

Author for correspondence.
Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Moscow

S. N. Senchenkova

Zelinsky Institute of Organic Chemistry, Russian Academy of Sciences

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Moscow

L. V. Dorofeeva

All-Russian Collection of Microorganisms (VKM), Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms, Pushchino Scientific Center for Biological Research, Russian Academy of Sciences

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Pushchino

L. I. Evtushenko

3All-Russian Collection of Microorganisms (VKM), Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms, Pushchino Scientific Center for Biological Research, Russian Academy of Sciences

Email: em_tulskaya@mail.ru
Russian Federation, Pushchino

References

Supplementary files