Development and validation of a methodology for HPLC analysis of clopidogrel

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

Aim – to develop a methodology for the chemical and toxicological analysis of clopidogrel using HPLC.

Material and methods. The study was performed on Clopidogrel bisulfate substance-powder, manufacturer: PJSC "Farmak", Ukraine, corresponding to the European Pharmacopoeia with an active substance content of 99.31% (LM2504208 series). For the chromatographic analysis we used a micro-column liquid chromatograph "Milichrome A-02" (CJSC "Econova", Russia). The analysis was done according to the unified HPLC technique developed by G.I. Baram.

Results. The highest spectral ratio by HPLC was observed at 280 nm / 210 nm (maximum clopidogrel peak area R = 1.0787). The calibration curve for the HPLC method was described by the equation: у = 0.0005912⋅х – 0.001385 (r = 0.9998; S02 = 25.29⋅10-7); linearity within 1−400 mcg/ml, which corresponded to the content of clopidogrel in the sample from 2 ng to 800 ng, respectively. Based on the values of the calibration curve, the LOD and LOQ were calculated: 2,334 mcg/ml and 7,074 mcg/ml, respectively.

Conclusion. A technique for the quantitative determination of clopidogrel by HPLC has been developed that allows for determining the substance in a mixture. The methodology was validated according to the following criteria: specificity, limit of detection, limit of quantitative determination, linearity, correctness and precision.

About the authors

Ludmila S. Anosova

Donetsk National Medical University named after M. Gorky

Author for correspondence.
Email: Apteka-NaNya@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-9380-4619

Assistant of the Department of Pharmaceutical and Medical Chemistry

Russian Federation, Donetsk

Irina P. Remezova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute – branch of the Volgograd State Medical University

Email: i.p.remezova@pmedpharm.ru
ORCID iD: 0000-0003-3456-8553

PhD, Professor, Department of Toxicological and Analytical Chemistry

Russian Federation, Pyatigorsk

Alexey M. Agafonov

Donetsk National Medical University named after M. Gorky

Email: Chuh2008@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-0682-1366

Assistant of the Department of Pharmaceutical and Medical Chemistry

Russian Federation, Donetsk

References

  1. Glushhenko VA, Irklienko EK. Сardiovascular morbidity – one of the most vital problems of modern health care. Medicine and health care organization. 2019;4(1):56-63. (In Russ.). [Глущенко В.А., Ирклиенко Е.К. Сердечно-сосудистая заболеваемость – одна из важнейших проблем здравоохранения. Медицина и организация здравоохранения. 2019;4(1):56-63].
  2. Kondratieva YuV, Moiseeva KE, Alekseeva AV, et al. Мedical and social problems of health of rural school children. Medicine and health care organization. 2018;3(4):9-15. (In Russ.). [Кондратьева Ю.В., Моисеева К.Е., Алексеева А.В., и др. Медико-социальные проблемы состояния здоровья сельских школьников. Медицина и организация здравоохранения. 2018;3(4):9-15].
  3. Alikhanova KA, Omarkulov BK, Abugalieva TO, et al. Results of sociological surveys population of the Karaganda region about the risk factors of stroke. Fundamental Research. 2013;9:804-809. (In Russ.). [Алиханова К.А., Омаркулов Б.К., Абугалиева Т.О., и др. Изучение распространенности заболеваний сердечно-сосудистой системы среди населения Карагандинской области. Фундаментальные исследования. 2013;9:804-809].
  4. Alekseenko SN, Drobot EN. Prevention of diseases. (In Russ.). [Алексеенко С.Н., Дробот Е.Н. Профилактика заболеваний]. Available at: https://monographies.ru/ru/book/section?id=9649
  5. Shal'nova SA, Deev AD. Coronary heart disease in Russia: incidence rate and treatment (according to epidemiological data). Terapevticheskii arkhiv. 2011;83(1):7-12. (In Russ.). [Шальнова С.А., Деев А.Д. Ишемическая болезнь сердца в России: распространенность и лечение (по данным клинико-эпидемиологических исследований). Терапевтический архив. 2011;83(1):7-12].
  6. Ishihara M. Fujino M, Ogawa H. Clinical Presentation, Management and Outcome of Japanese Patients With Acute Myocardial Infarction in the Troponin Era – Japanese Registry of Acute Myocardial Infarction Diagnosed by Universal Definition (JMINUET). Circulation Journal. 2015;79(6):1255-1262.
  7. Davletov КК, Berkinbayev SF, Аmirov BB, et al. Standardization of morbidity and mortality rates as a predicate for correct inter-regional comparisons. Medicine (Almaty). 2015;6:2-5. (In Russ.). [Давлетов К.К., Беркинбаев С.Ф., Амиров Б.Б., и др. Стандартизация показателей заболеваемости и смертности как основа для корректного сравнения разных регионов. Медицина (Алматы). 2015;6:2-5].
  8. Romanova MM, Babkin AP, Zuykova AA. Сomparative analysis of the incidence of cardiovascular pathology in the therapeutic areas in an urban and a rural clinic. International journal of applied and fundamental research. 2017;4:368-371. (In Russ.). [Романова М.М., Бабкин А.П., Зуйкова А.А. Сравнительный анализ заболеваемости сердечно-сосудистой патологией на терапевтических участках в городской и сельской поликлинике. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2017;4:368-371].
  9. The incidence of the population of Russia 2000–2011 (statistical materials). M., 2013. (In Russ.). [Заболеваемость населения России 2000–2011 (статистические материалы). М., 2013]. Available at: http://www.gks.ru/wps/wcm/connect/rosstat_main/rosstat/ru/statistics/publications/catalog/doc1139919134734
  10. Нealthcare in Russia. Russian statistical yearbook. M., 2013. (In Russ.). [Здравоохранение в России. Статистический сборник. М., 2013].
  11. Anosova LS. Development of conditions for analytical diagnosis of poisoning with clopidogrel. Farmatsiya. 2022;71(6):12-18. (In Russ.). [Аносова Л.С. Разработка условий аналитической диагностики отравлений клопидогрелом. Фармация. 2022;71(6):12-18]. doi: 10.29296/25419218-2022-06-02
  12. Kochetova YuA, Klimakova MV. Psychological State Researches in the Context of the COVID-19 Pandemic [E-journal]. Journal of Modern Foreign Psychology. 2021;10(1):48-56. (In Russ.). [Кочетова Ю.А., Климакова М.В. Исследования психического состояния людей в условиях пандемии COVID-19. Современная зарубежная психология. 2021;10(1):48-56]. doi: 10.17759/jmfp.2021100105
  13. Number of suicide attempts in Colombia as of May 2021, by department. Available at: https://www.statista.com/statistics/1113062/colombia-number-suicide-attempts-department/
  14. Borderías Clau L, Garrapiz López J, Caballero G. Pulmonary haemorrhage and haemothorax after massive ingestion of clopidogrel as a suicide attempt. Arch Bronconeumol. 2009;45(11):570-1. doi: 10.1016/j.arbres.2009.06.009
  15. Arslan E. Massive Ingestion of Clopidogrel in a Suicidal Attempt: A Case Report and Review of Literature İntihar Amaçli Aşiri Doz Clopidogrel Alimi: Olgu Sunumu ve Literatürün Gözden Geçirilmesi. JAEM. 2013;12:167-9. doi: 10.5152 /JAEM.2013.046
  16. Fukusako T, et al. Case of thrombotic thrombocytopenic purpura associated with clopidogrel. Rinsho Shinkeigaku. 2007;47(10):635-638.
  17. Kocabay G, Okçular I, Akkaya V, Güler K. Suicide attempt with clopidogrel. Hum Exp Toxicol. 2006;25(12):731-734.
  18. Anosova LS. The distribution of clopidogrel in the organs of poisoned animals. Farmaciya. 2021;70(6):31-36. (In Russ.). [Аносова Л.С. Распределение клопидогрела в органах отравленных животных. Фармация. 2021;70(6):31-36]. doi: 10.29296/25419218-2021-06-06
  19. Baram GI. Chromatograph Milichrome A–02. Determination of substances using HPLC–UV databases. Novosibirsk, 2005. (In Russ.). [Барам Г.И. Хроматограф «Милихром А–02». Определение веществ с применением баз данных «ВЭЖХ–УФ». Новосибирск, 2005].
  20. State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIV ed. Vol I. “Measuring utensils” [electronic edition]. (In Russ.). [Государственная Фармакопея РФ, XIV изд. Том I. «Мерная посуда»]. Available at: https://femb.ru/record/pharmacopea14 (12 July 2022)
  21. State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIV ed. Vol. I. “Validation of analytical techniques” [electronic edition]. (In Russ.). [Государственная Фармакопея РФ, XIV изд. Том I. «Валидация аналитических методик»]. Available at: https://femb.ru/record/pharmacopea14
  22. State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIV ed. Vol. II. “Clopidogreli sulfatis tabulettae” [electronic edition]. (In Russ.). [Государственная Фармакопея РФ, XIV изд. Том II. «Клопидогрела сульфат. Таблетки»]. Available at: https://femb.ru/record/pharmacopea14
  23. European Pharmacopea. 7th ed. Council of Europe. Strasbourg, 2011.
  24. Derzhavna Farmakopeya Ukraїni. 1-e vid. Dopovnennya 4. Harkіv, 2011. (In Ukrain.).
  25. Setkina SB, Hishova OM, Zubkevich LV, et al. Comparative evaluation of the content of impurities in medicinal products containing clopidogrel bisulfate. Vestnik farmacii. 2014;2(64):50-58. (In Russ.). [Сеткина С.Б., Хишова О.М., Зубкевич Л.В., и др. Сравнительная оценка содержания примесей в лекарственных средствах, содержащих клопидогреля бисульфат. Вестник фармации. 2014;2(64):50-58].
  26. Pawaskar PS, Dighe VV, Adhyapak SS. Development of Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for Determination of (+)-(S)-(o-Chlorophenyl)-6,7-Dihydrothieno [3,2-c] pyridine-5(4H)-acetic acid, Hydrochloride and Methyl (+/-) - (o-Chlorophenyl)-4,5-Dihydrothieno[2,3-c]pyridine-6(7H)-acetate, Hydrochloride from Clopidogrel Besylate. International Journal for Pharmaceutical Research Scholars. 2017;2(1):16-23.
  27. Saber AL, Elmosallamy MA, Amin AA. Liquid Chromatographic and Potentiometric Methods for Determinations of Clopidogrel. Journal of Food and Drug Analysis. 2008;16(2):11-18.
  28. Kavitha J, Kokilambigai KS, Seetharaman R, et al. A Review of Analytical Methods for the determination of Clopidogrel in Pharmaceuticals and Biological Matrices, Critical Reviews in Analytical Chemistry. Analytical Chemistry. 2018;48(2):119-131. doi: 10.1080/10408347.2018.1427548
  29. Liu G, Dong C, Shen W, et al. Development and validation of an HPLC-MS/MS method to determine clopidogrel in human plasma. Acta Pharm Sin B. 2016;6(1):55-63. doi: 10.1016/j.apsb.2015.11.001

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. The direction signed by all authors
Download (166KB)
Indexing metadata
3. fig. 1

Download (43KB)
Indexing metadata
4. fig. 2

Download (24KB)
Indexing metadata
5. Figure 1. Chromatogram of clopidogrel (concentration 10 μg/ml).

Download (405KB)
Indexing metadata
6. Figure 2. A calibration curve of the quantitative determination of clopidogrel by HPLC (λ=280 nm, sample volume 2 µl).

Download (262KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2022 Anosova L.S., Remezova I.P., Agafonov A.M.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».