ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ТРАНСФОРМАЦИИ Mycobacterium abscessus МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОПОРАЦИИ

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Эффективная трансформация микобактерий и, в частности, M ycobacterium a bs cessus , значительно осложняется специфическим строением их клеточной стенки. Наиболее широко используемым и эффективным методом введения молекул плазмидной и фаговой ДНК в клетки микобактерий является электропорация . На эффективность электропорации существенное влияние оказывают многие факторы, такие как природа ДНК, селективный маркер, добавки в питательную среду, параметры электрического импульса, вид и штамм микобактерии-реципиента. Хотя условия эффективной электропорации для медленнорастущего патогена M ycobacterium tuberculosis и быстрорастущего сапрофита M ycobacterium smegmatis подробно описаны в литературе, рекомендации относительно M. a bs cessus носят разрозненный и даже противоречивый характер. В настоящей работе установлено, что эффективная трансформация M . abscessus АТСС 19977 репликативным вектором pMV 261 методом электропорации возможна при использовании культуры в логарифмической фазе роста в достаточно широком диапазоне значений оптической плотности ОП 600 = 0.8–4.2, при этом охлаждение несущественно влияло на частоту трансформации. Критически важным параметром была масса вносимой ДНК. Установлено, что число полученных трансформантов в расчете на 1 мкг ДНК возраста ло пропорционально квадрату ее массы, при внесении менее 0.5 мкг плазмидной ДНК эффективность электропорации была недостаточной.

Об авторах

Е. В. Захарьева

Институт биохимии им. А.Н. Баха, Федеральный исследовательский центр “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук

Москва, 119071 Россия

Б. А. Мартини

Институт биохимии им. А.Н. Баха, Федеральный исследовательский центр “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук

Москва, 119071 Россия

Е. Г. Салина

Институт биохимии им. А.Н. Баха, Федеральный исследовательский центр “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук

Email: elenasalina@yandex.ru
Москва, 119071 Россия

Список литературы

  1. Degiacomi G ., Sammartino J . C ., Chiarelli L . R ., Ri abova O ., Makarov V ., Pasca M . R . // Int . J . Mol . Sci . 2019. V. 20. № 23. P. 5868. https://doi.org/10.3390/ijms20235868
  2. To K., Cao R., Yegiazaryan A., Owens J., Venketara man V. // J. Clin. Med. 2020. V. 9. № 8. P. 2541. https ://doi.org/10.3390/jcm9082541
  3. Honda J.R., Virdi R., Chan E.D. // Front. Microbiol. 2018. V. 9. P. 2029. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.02029
  4. Schiff H.F., Jones S., Achaiah A., Pereira A., Stait G., Green B . // Sci. Rep. 2019. V. 9. № 1. P. 1730. https://doi.org/10.1038/s41598-018-37350-8
  5. Griffith D.E., Aksamit T., Brown-Elliott B.A., Catanza-ro A., Daley C., Gordin F. et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2007. V. 175. № 4. P. 367–416. https://doi.org/10.1164/rccm.200604-571ST
  6. Brown-Elliott B.A., Wallace R.J. // Clin. Microbiol. Rev. 2002. V. 15. № 4. P. 716–746. https://doi.org/10.1128/CMR.15.4.716-746.2002
  7. Falkinham J.O. // Clin. Chest Med. 2015. V. 36. № 1. P. 35–41. https://doi.org/10.1016/j.ccm.2014.10.003
  8. Zwietering M.H., Jongenburger I., Rombouts F.M., Van’t Riet K. // Appl. Environ. Microbiol. 1990. V. 56. № 6. P. 1875–1881. https://doi.org/10.1128/aem.56.6.1875-1881.1990
  9. Johansen M.D., Herrmann J.L., Kremer L. // Nat. Rev. Microbiol. 2020. V. 18. № 7. P. 392–407. https://doi.org/10.1038/s41579-020-0331-1
  10. Koh W.J., Stout J.E., Yew W.W. // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2014. V. 18. № 10. P. 1141–1148. https://doi .org/10.5588/ijtld.14.0134
  11. Koh W.J., Jeon K., Lee N.Y., Kim B.J., Kook Y.H., Lee S.H. et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2011. V. 183. № 3. P. 405–410. https://doi.org /10.1164/rccm.201003-0395OC
  12. Lopeman R.C., Harrison J., Desai M., Cox J.A. // Microorganisms. 2019. V. 7. № 3. P. 90. https://doi.org/10.3390/microorganisms7030090
  13. Gopalaswamy R., Shanmugam S., Mondal R., Subbi- an S. // J. Biomed. Sci. 2020. V. 27. № 1. P. 74. https://doi.org/10.1186/s12929-020-00667-6
  14. Bryant J.M., Grogono D.M., Rodriguez-Rincon D., Everall I., Brown K.P., Moreno P. et al. // Science. 2016. V. 354. № 6313. P. 751 –757. https://doi.org/10.1126/science.aaf8156
  15. Brown-Elliott B.A., Nash K.A., Wallace R.J. // Clin. Microbiol. Rev. 2012. V. 25. № 3. P. 545–582. https://doi.org/10.1128/CMR.05030-11
  16. Sharma S.K., Upadhyay V. // Indian J. Med. Res. 2020. V. 152. № 3. P. 185–226. https://doi. org/10.4103/ijmr.IJMR_902_20
  17. Chen J., Zhao L., Mao Y., Ye M., Guo Q., Zhang Y. et al. // Front. Microbiol. 2019. V. 10. P. 1977. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.01977
  18. Ripoll F., Pasek S., Schenowitz C., Dossat C., Barbe V., Rottman M. et al . // PLoS One. 2009. V. 4. № 6. P. e5660. https://doi.org/10.1371/journal. pone.0005660
  19. Jacobs W.R., Kalpana G.V., Cirillo J.D., Pascopella L., Snapper S.B., Udani R.A. et al . // Methods Enzymol. 1991. V. 204. P. 537–555. https://doi.org/10.1016/0076-6879(91)04027-L
  20. Mycobacteria Protocols / Eds. T.Parish, A. Kumar N.Y.: Humana Press, 2021. 736 p.
  21. Campo-Pérez V., Cendra M.D.M., Julián E., Tor- rents E. // N. Biotechnol. 2021. V. 63. P. 10–18. https://doi.org/10.1016/j.nbt.2021.02.003
  22. Medjahed H., Singh A.K. Genetic Manipulation of Mycobacterium abscessus. // Curr. Protoc. Microbiol. 2010. V. 18. № 1. P. 10D-2. https://doi.org/10.1002/9780471729259.mc10d02s18
  23. Stover C.K., de la Cruz V.F., Fuerst T.R., Burlein J.E., Benson L.A., Bennett L.T. et al. // Nature. 1991. V. 351. № 6326. P. 456–460. https://doi.org/10.1038/351456a0
  24. Kalpana G. V., Bloom B. R., Jacobs W. R. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. V. 88. № 12. P. 5433–5437. https:// doi: 10.1073/pnas.88.12.5433
  25. Snapper S.B., Melton R.E., Mustafa S., Kieser T., Jacobs W.R. Jr // Mol. Microbiol. 1990. V. 4. № 11. P. 1911–1919. https://doi.org/10.1111/ j.1365-2958.1990.tb02040.x
  26. Lee S.H., Cheung M., Irani V., Carroll J.D., Inami- ne J.M., Howe W.R. et al. // Tuberculosis. 2002. V. 82. № 4–5. P. 167–174. https://doi .org/10.1054/tube.2002.0335
  27. Rominski A., Selchow P., Becker K., Brülle J.K., Dal Molin M., Sander P. // J. Antimicrob. Chemother. 2017. V. 72. № 8. P. 2191–2200. https://doi. org/10.1093/jac/dkx125
  28. Akusobi C., Benghomari B.S., Zhu J., Wolf I.D., Singhvi S., Dulberger C. L. et al. // Elife. 2022. V. 11. P. e71947. https://doi.org/10.7554/eLife.71947
  29. Viljoen A., Gutiérrez A.V., Dupont C., Ghigo E., Kre- mer L. // Front. Cell. Infect. Microbiol. 2018. V. 8. P. 69. https://doi.org/10.3389/fcimb.2018.00069
  30. Wards B.J., Collins D.M. // FEMS Microbiol. Lett. 1996. V. 145. № 1. P. 101 –105. https://doi.org/10.1111/j.1574-6968.1996.tb08563.x
  31. David M., Lubinsky-Mink S., Ben-Zvi A., Ulitzur S., Khun J., Suissa M. // Plasmid. 1992. V. 28. № 3. P. 267–271. https://doi.org/10.1016/0147-619X(92)90059-J

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Российская академия наук, 2025

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».