Adaptation of african swine fever virus (Asfarviridae: Asfivirus)to growth in the continuous culture PPK-66b cells by the method of accelerated passaging

封面

如何引用文章

全文:

详细

Introduction. African swine fever virus (ASF) is a large, enveloped virus with an icosahedral capsid morphology and a double-stranded DNA genome ranging in size from 170 to 190 kb. The replication cycle proceeds in two phases, the early phase lasting 4–6 hours and the late 8–20 hours after infection. The adaptation of the ASF virus to growth in continuous cell lines makes efficient and reliable genetic analysis and more accurate interpretation of its results.

Objective. Adaptation of a new isolate of the ASF virus to growth in a continuous cell line by the method of accelerated passages and preliminary genetic analysis of the resulting strain.

Materials and methods. For virus isolation and passaging of the ASF virus, a porcine leukocyte cell culture (PL) and continuous cell cultures of porcine origin (ST, PK, PPK-66b) were used with Eagle MEM and HLA essential media with 10% porcine or fetal serum.

Results. The article presents data on the isolation and analysis of the changes in the reproductive properties of a new African swine fever (ASF) virus isolate in the process of adaptation to growth in a continuous piglet kidney cell culture clone b (PPK-66b). The current state of the problem of cultivation of the ASF virus, the features of its reproduction, and the basis of the genetic differentiation of its isolates are described in detail. Understanding the uniqueness of the nature of the ASF virus determined the approaches to the processes of its cultivation and adaptation. In this regard, the results of studies of cultural properties, and analysis of the nucleotide sequence of 6 genes of the new isolate, as well as phylogenetic analysis of these genes with already known strains and isolates of the ASF virus are presented.

Conclusion. A new strain obtained in the process of cell adaptation of ASVF/Znaury/PPK-23 ASF virus by the accelerated passaging method reaches a high level of reproduction in 72 hours with an accumulation titer of 7.07 lg HAdE50/cm3. Primary genetic analysis allowed to establish the main phylogenetic relationships of the newly isolated strain with previously known variants of the current ASF panzootic.

作者简介

Natalia Vlasova

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: vlanany@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-8707-7710

Dr of Biol. Sci., Principal Researcher of the Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Oleg Chernykh

Department of Veterinary Medicine of the Krasnodar Territory

Email: gukkvl50@kubanvet.ru
ORCID iD: 0000-0001-8584-8251

Dr of Vet. Sci., Professor, Director

俄罗斯联邦, 350051, Krasnodar Territory, Krasnodar

Roman Krivonos

Department of Veterinary Medicine of the Krasnodar Territory

Email: uv@krasnodar.ru
ORCID iD: 0009-0008-4580-6776

Ph.D. of Vet. Sci., Head

俄罗斯联邦, 350051, Krasnodar Territory, Krasnodar

Oleg Verkhovsky

Research Institute for Diagnosis and Prevention of Human and Animal Diseases

Email: info@dpri.ru
ORCID iD: 0000-0003-0784-9341

Dr of Biol. Sci., Professor, President

俄罗斯联邦, 123098, Moscow

Taras Aliper

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: aliper@vetbio.ru
ORCID iD: 0000-0003-2696-1363

Dr. of Biol. Sci., Professor, Head of the Laboratory of Epizootology, diagnostics and prevention of viral diseases of pigs

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Afshona Anoyatbekova

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: aafshona@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6579-779X

Ph.D.of Vet. Sci., Senior Researcher, Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Elena Zhukova

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: evz-sk@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7423-6102

Ph.D. Sc., Leading Researcher, Laboratory of Biochemistry and of Molecular Biology

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Oksana Kucheruk

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: kussike17@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2161-9406

Ph.D. of Vet. Sci., Leading Researcher, Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Anton Yuzhakov

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

编辑信件的主要联系方式.
Email: anton_oskol@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9354-6824

Ph.D. of Biol. Sci., Head of the Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Mikhail Gulyukin

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: admin@viev.ru
ORCID iD: 0000-0002-7489-6175

Dr. of Vet.Sci., Academician of RAS, Head of Scientific Areas Center in the administration

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

Aleksey Gulyukin

Federal Scientific Center – All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after V.I. K.I. Scriabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences

Email: admin@viev.ru
ORCID iD: 0000-0003-2160-4770

Dr. of Vet. Sci., Corresponding Member RAS, Director

俄罗斯联邦, 109428, Moscow

参考

  1. Salas M.L., Andrés G. African swine fever virus morphogenesis. Virus Res. 2013; 173(1): 29–41. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.09.016
  2. Rojo G., García-Beato R., Viñuela E., Salas M.L., Salas J. Replication of African swine fever virus DNA in infected cells. Virology. 1999; 257(2): 524–36. https://doi.org/10.1006/viro.1999.9704
  3. García-Beato R., Salas M.L., Viñuela E., Salas J. Role of the host cell nucleus in the replication of African swine fever virus DNA. Virology. 1992; 188(2): 637–49. https://doi.org/10.1016/0042-6822(92)90518-t
  4. Breese S.S. Jr., DeBoer C.J. Electron microscope observations of African swine fever virus in tissue culture cells. Virology. 1966; 28(3): 420–8. https://doi.org/10.1016/0042-6822(66)90054-7
  5. Casal I., Enjuanes L., Viñuela E. Porcine leukocyte cellular subsets sensitive to African swine fever virus in vitro. J. Virol. 1984; 52(1): 37–46. https://doi.org/10.1128/JVI.52.1.37-46.1984
  6. Wardley R.C., Wilkinson P.J. The growth of virulent African swine fever virus in pig monocytes and macrophages. J. Gen. Virol. 1978; 38(1): 183–6. https://doi.org/10.1099/0022-1317-38-1-183
  7. Gómez-Villamandos J.C., Hervás J., Méndez A., Carrasco L., Martín de las Mulas J., Villeda C.J., et al. Experimental African swine fever: apoptosis of lymphocytes and virus replication in other cells. J. Gen. Virol. 1995; 76 ( Pt 9): 2399–405. https://doi.org/10.1099/0022-1317-76-9-2399
  8. Sierra M.A., Bernabe A., Mozos E., Mendez A., Jover A. Ultrastructure of the liver in pigs with experimental African swine fever. Vet. Pathol. 1987; 24(5): 460–2. https://doi.org/10.1177/030098588702400516
  9. Carrasco L., de Lara F.C., Martín de las Mulas J., Gómez-Villamandos J.C., Pérez J., Wilkinson P.J., et al. Apoptosis in lymph nodes in acute African swine fever. J. Comp. Pathol. 1996; 115(4): 415–28. https://doi.org/10.1016/s0021-9975(96)80075-2
  10. Esteves A., Marques M.I., Costa J.V. Two-dimensional analysis of African swine fever virus proteins and proteins induced in infected cells. Virology. 1986; 152(1): 192–206. https://doi.org/10.1016/0042-6822(86)90384-3
  11. Baylis S.A., Banham A.H., Vydelingum S., Dixon L.K., Smith G.L. African swine fever virus encodes a serine protein kinase which is packaged into virions. J. Virol. 1993; 67(8): 4549–56. https://doi.org/10.1128/JVI.67.8.4549-4556.1993
  12. Krug P.W., Holinka L.G., O’Donnell V., Reese B., Sanford B., Fernandez-Sainz I., et al. The progressive adaptation of a georgian isolate of African swine fever virus to vero cells leads to a gradual attenuation of virulence in swine corresponding to major modifications of the viral genome. J. Virol. 2015; 89(4): 2324–32. https://doi.org/10.1128/JVI.03250-14
  13. Mazloum A., Igolkin A.S., Zinyakov N.G., Van Schalkwyk A., Vlasova N.N. Changes in the genome of African swine fever virus (Asfarviridae: Asfivirus: African swine fever virus) associated with adaptation to reproduction in continuous cell culture. Voprosy virusologii. 2021; 66(3): 211–6. https://doi.org/10.36233/0507-4088-50 (in Russian)
  14. Prudnikova E.Yu., Balyshev V.M., Yurkov S.G., Gal’nbek T.V., Blysheva V.I. Adaptation of African swine fever virus to continuous cell cultures. Nauchnyy zhurnal KubGAU. 2012; (80): 70–9. https://elibrary.ru/pbuuyj (in Russian)
  15. Boinas F.S., Hutchings G.H., Dixon L.K., Wilkinson P.J. Characterization of pathogenic and non-pathogenic African swine fever virus isolates from Ornithodoros erraticus inhabiting pig premises in Portugal. J. Gen. Virol. 2004; 85(Pt. 8): 2177–87. https://doi.org/10.1099/vir.0.80058-0
  16. Borca M.V., Rai A., Ramirez-Medina E., Silva E., Velazquez-Salinas L., Vuono E., et al. A Cell culture-adapted vaccine virus against the current African swine fever virus pandemic strain. J. Virol. 2021; 95(14): e0012321. https://doi.org/10.1128/JVI.00123-21
  17. Monteagudo P.L., Lacasta A., López E., Bosch L., Collado J., Pina-Pedrero S., et al. BA71ΔCD2: a new recombinant live attenuated African swine fever virus with cross-protective capabilities. J. Virol. 2017; 91(21): e01058–17. https://doi.org/10.1128/JVI.01058-17
  18. Reis A.L., Goatley L.C., Jabbar T., Sanchez-Cordon P.J., Netherton C.L., Chapman D.A.G., et al. Deletion of the African swine fever virus gene DP148R does not reduce virus replication in culture but reduces virus virulence in pigs and induces high levels of protection against challenge. J. Virol. 2017; 91(24): e01428–17. https://doi.org/10.1128/JVI.01428-17
  19. Neilan J.G., Zsak L., Lu Z., Kutish G.F., Afonso C.L., Rock D.L. Novel swine virulence determinant in the left variable region of the African swine fever virus genome. J. Virol. 2002; 76(7): 3095–104. https://doi.org/10.1128/jvi.76.7.3095-3104.2002
  20. Gallardo C., Mwaengo D.M., Macharia J.M., Arias M., Taracha E.A., Soler A., et al. Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes. Virus Genes. 2009; 38(1): 85–95. https://doi.org/10.1007/s11262-008-0293-2
  21. Elsukova A.A., Shevchenko I.V., Varentsova A.A., Zinyakov N.G., Igolkin A.S., Vlasova N.N. Comparative analysis of molecular and biological properties of African swine fever virus isolates collected in 2013 from Russian Federation. In: Abstracts 8th Annual EPIZONE Meeting «Primed for Tomorrow». Frideriksberg; 2014.
  22. Dixon L.K., Chapman D.A., Netherton C.L., Upton C. African swine fever virus replication and genomics. Virus Res. 2013; 173(1): 3–14. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.10.020
  23. Bastos A.D., Penrith M.L., Crucière C., Edrich J.L., Hutchings G., Roger F., et al. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation. Arch. Virol. 2003; 148(4): 693–706. https://doi.org/10.1007/s00705-002-0946-8
  24. Gallardo C., Mwaengo D.M., Macharia J.M., Arias M., Taracha E.A., Soler A., et al. Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes. Virus Genes. 2009; 38(1): 85–95. https://doi.org/10.1007/s11262-008-0293-2
  25. Borca M.V., Kutish G.F., Afonso C.L., Irusta P., Carrillo C., Brun A., et al. An African swine fever virus gene with similarity to the T-lymphocyte surface antigen CD2 mediates hemadsorption. Virology. 1994; 199(2): 463–8. https://doi.org/10.1006/viro.1994.1146

补充文件

附件文件
动作
1. JATS XML
下载

版权所有 © Vlasova N.N., Chernykh O.Y., Krivonos R.A., Verkhovsky O.A., Aliper T.I., Anoyatbekova A.M., Zhukova E.V., Kucheruk O.D., Yuzhakov A.G., Gulyukin M.I., Gulyukin A.M., 2023

Creative Commons License
此作品已接受知识共享署名 4.0国际许可协议的许可

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».