Оценка клеточного иммунитета макаков резусов методом проточной цитометрии после экспериментального инфицирования вирусом Эбола (Filoviridae; Ebolavirus: Zaire ebolavirus)

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Введение. Возникающие в последнее десятилетие вспышки болезни, вызываемой вирусом Эбола (ВЭ) (БВВЭ), определяют необходимость изучения патогенеза этой нозологической формы, формирования специфического иммунитета, а также создания эффективных средств профилактики и лечения. Все звенья борьбы с распространением заболевания невозможны без экспериментального моделирования инфекции на чувствительных к ней лабораторных животных, которыми для БВВЭ являются макаки резусы.

Цель исследования – оценка клеточного иммунитета макаков резусов методом проточной цитометрии (цитофлуориметрии) (ПЦ) после экспериментального инфицирования ВЭ.

Материал и методы. Самцов макаков резусов внутримышечно инфицировали ВЭ, штамм Заир, в дозе 15 LD50 (доза возбудителя, вызывающая гибель 50% инфицированных животных). С использованием метода ПЦ определены уровни 18 популяций/субпопуляций лимфоцитов периферической крови животных до экспериментального инфицирования возбудителем и в терминальной стадии заболевания.

Результаты и обсуждение. Выявлено достоверное изменение после инфицирования уровня популяций/ субпопуляций лимфоцитов, указывающее на сочетание активации и супрессии иммунной системы при БВВЭ. Увеличение содержания отмечено для Т-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих соответствующие маркёры ранней активации. Снижение количества показано для Т-лимфоцитов и дубль-позитивных Т-лимфоцитов с экспрессией соответствующих маркёров поздней активации, а также натуральных киллеров, экспрессирующих CD8 (статистическая значимость оценивалась величиной р < 0,05).

Заключение. Впервые в Российской Федерации методом ПЦ проведено сравнение характеристик клеточного иммунитета макаков резусов до и после экспериментального инфицирования ВЭ. Информация по динамике изменений популяций лимфоцитов может иметь диагностическую значимость в ходе изучения патологического процесса при инфицировании данным возбудителем, контроле эффективности терапии, прогнозе возникновения и течения заболевания, а также его исхода.

Об авторах

Г. В. Борисевич

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Автор, ответственный за переписку.
Email: 48cnii@mil.ru
ORCID iD: 0000-0002-0843-9427

Борисевич Галина Валентиновна, канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

С. Л. Кириллова

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-1245-9225

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

И. В. Шатохина

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-9503-5120

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

В. Н. Лебедев

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-6552-4599

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

Н. В. Шагарова

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0001-9523-8676

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

С. И. Сыромятникова

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-1490-9448

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

А. Ф. Андрус

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-7430-9401

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

Е. А. Ковальчук

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-7279-196X

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

В. Б. Кириллов

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-2916-0668

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

М. Л. Беспалов

ООО «МедисКоМ»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-3220-6153

127254, Москва, Россия

Россия

А. А. Петров

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-9714-2085

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

А. В. Ковальчук

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-9681-9891

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

В. Б. Пантюхов

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-1313-2059

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

Д. А. Кутаев

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0001-9009-4909

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

С. В. Борисевич

ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-6742-3919

141306, Сергиев Посад-6, Россия

Россия

С. Л. Кузнецов

Управление начальника войск радиационной, химической и биологической защиты Вооружённых Сил Министерства обороны Российской Федерации

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-2705-8774

119160, Москва, Россия

Россия

Список литературы

  1. WHO. Ebola virus disease Democratic Republic of Congo: external situation report 98/ 2020. Available at: https://www.who.int/publications/i/item/10665-332654 (accessed 16 August 2021).
  2. Cenciarelli O., Gabbarini V., Pietropaoli S., Maliziaa A., Tamburrinic A., Ludovicic G.M., et al. Viral bioterrorism: learning the lesson of Ebola virus in West Africa 2013–2015. Virus. Res. 2015; 210(12): 318–26. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2015.09.002
  3. Wieland E., Shipkova M. Lymphocyte surface molecules as immune activation biomarkers. Clin. Biochem. 2016; 49(4-5): 347–54. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2015.07.099
  4. Wauquier N., Becquart P., Padilla C., Baize S., Leroy E.M. Human fatal Zaire Ebola virus infection is associated with an aberrant innate immunity and with massive lymphocyte apoptosis. PLoS Negl. Trop. Dis. 2010; 4(10): e837. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0000837
  5. Dahlke C., Lunemann S., Kasonta R., Kreuels B., Schmiedel S., Ly M.L., et al. Comprehensive characterization of cellular immune responses following Ebola virus infection. J. Infect. Dis. 2017; 215(2): 287–92. https://doi.org/10.1093/infdis/jiw508
  6. Wilson J.A., Hart M.K. Protection from Ebola virus mediated by cytotoxic T lymphocytes specific for the viral nucleoprotein. J. Virol. 2001; 75(6): 2660–4. https://doi.org/10.1128/JVI.75.6.2660-2664.2001
  7. Warfield K.L., Olinger G.G. Protective role of cytotoxic T lymphocytes in filovirus hemorrhagic fever. J. Biomed. Biotechnol. 2011; 2011: 984241. https://doi.org/10.1155/2011/984241e
  8. Bente D., Gren J., Strong J.E., Feldmann H. Disease modeling for Ebola and Marburg viruses. Dis. Model. Mech. 2009; 2(1-2): 12–7. https://doi.org/10.1242/dmm.000471
  9. Хаитов Р.М. Иммунология: структура и функции иммунной системы: учебное пособие. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2019.
  10. Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян А.А., Черешнев В.А. Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения (методом многоцветного цитометрического анализа). Медицинская иммунология. 2009; 11(2-3): 227–38. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2009-2-3-227-238.
  11. Лапин Б.А. К вопросу об использовании в медицинских экспериментах лабораторных приматов. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2010; (2): 3–6.
  12. Пшеничнов В.А., Махлай А.А., Михайлов В.В. Исследования с вирусами Марбург, Ласса и Эбола. Вопросы вирусологии. 1993; 38(2): 54–9.
  13. Sestak K., Scheiners C., Wu X.W., Hollemweguer E. Identification of anti-human CD antibodies reactive with rhesus macaque peripheral blood cells. Vet. Immunol. Immunopathol. 2007; 119(1-2): 21–6. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2007.06.011
  14. Хайдуков С.В., Байдун Л.В., Зурочка А.В., Тотолян А.А. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов». Российский иммунологический журнал. 2014; (4): 974–92. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2012-3-255-268
  15. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шестицветного цитофлуоримерического анализа. Медицинская иммунология. 2015; 17(1): 19–26. https://doi.org/0.15789/1563-0625-2015-1-19-26
  16. Telford W.G., Babin S.A., Khorev S.V., Rowe S.H. Green fiber lasers: an alternative to traditional DPSS green lasers for flow cytometry. Cytometry A. 2009; 75(12): 1031–9. https://doi.org/10.1002/cyto.a.20790
  17. Hammerbeck C., Goetz C., Bonnevier J. Primary and secondary antibodies and flow cytometry controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Cham: Springer; 2018: 75–103. https://link.springer.com/chapter/10.1007%2F978-3-319-98071-3_6
  18. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учебное пособие. М.: Высшая школа; 1990.
  19. Reed D.S., Hensley L.E., Geisbert J.B., Jahrling P.B., Geisbert T.W. Depletion of Peripheral Blood T Lymphocytes and NK Cells During the Course of Ebola Hemorrhagic Fever in Cynomolgus Macaques. Viral. Immunol. 2004; 17(3): 390–400. https://doi.org/10.1089/vim.2004.17.390
  20. Sanchez A., Lukwiya M., Bausch D., Mahanty S., Sanchez A.J., Wagoner K.D., et al. Analysis of human peripheral blood samples from fatal and nonfatal cases of Ebola (Sudan) hemorrhagic fever: cellular responses, virus load, and nitric oxide levels. J. Virol. 2004; 78(190): 10370–7. https://doi.org/10.1128/JVI.78.19.10370-10377.2004
  21. McElroya A.K., Akondyc R.S., Davisc C.W., Ellebedyc A.H., Mehtae A.K., Krafte C.S., et al. Human Ebola virus infection results in substantial immune activation. PNAS. 2015; 112(15): 4719–24. https://doi.org/10.1073/pnas.1502619112
  22. Cimini E.С., Viola D., Cabeza-Cabrerizo M., Romanelli А., Tumino N., Sacchi A., et al. Different features of Vδ2 T and NK cells in fatal and non-fatal human Ebola infections. PLoS Trop. Dis. 2017; 11(5): e0005645. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0005645
  23. Addison E.G., North J., Bakhsh I., Marden C., Haq S., Al-Sarraj S., et al. Ligation of CD8alpha on human natural killer cells prevents activation-induced apoptosis and enhances cytolytic activity. Immunology. 2005; 116(3): 354–61. https://doi.org/10.1111/j.1365-2567.2005.02235.x

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Борисевич Г.В., Кириллова С.Л., Шатохина И.В., Лебедев В.Н., Шагарова Н.В., Сыромятникова С.И., Андрус А.Ф., Ковальчук Е.А., Кириллов В.Б., Беспалов М.Л., Петров А.А., Ковальчук А.В., Пантюхов В.Б., Кутаев Д.А., Борисевич С.В., Кузнецов С.Л., 2021

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».