Нокаут-мутации в генах, кодирующих переносчики фосфата, нарушают адаптацию Saccharomyces cerevisiae к потреблению этанола

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Переносчики фосфата в клетках дрожжей ответственны за гомеостаз фосфора, а также опосредованно вовлечены в регуляцию различных адаптивных процессов. Одним из таких процессов является адаптация клеток к потреблению этанола, которое требует значительных изменений в фосфорном обмене. В данной работе показано, что штаммы Saccharomyces cerevisiae с нокаут-мутациями в генах переносчиков фосфата PHO87, PHO89, PHO90 и PHO91 хуже приспосабливаются к потреблению этанола при его концентрации 4%. Это выражается как в удлинении лаг-фазы, так и в снижении скорости роста на активной стадии. Клетки мутантов отличаются по содержанию неорганических полифосфатов, но не ортофосфата, от родительского штамма: они содержат меньше длинноцепочечных полифосфатов. Этот эффект наблюдали при культивировании на этаноле, но не на глюкозе. При культивировании на среде, содержащей 4% этанол, штамм с нокаут-мутацией в гене PHO84, кодирующем переносчик фосфата и двухвалентных металлов, а также штаммы-нокауты по генам PHM6 и PHM7, ответственным за сверхнакопление полифосфатов, не проявили особенностей роста на среде с 4% этанолом по сравнению с родительским штаммом. Обсуждается возможная роль переносчиков фосфата и неорганических полифосфатов в адаптации дрожжей к потреблению этанола.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Л. А. Ледова

ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук”

Автор, ответственный за переписку.
Email: alla@ibpm.ru

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН

Россия, 142290, Пущино

Л. П. Рязанова

ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук”

Email: alla@ibpm.ru

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН

Россия, 142290, Пущино

Т. В. Кулаковская

ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук”

Email: alla@ibpm.ru

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН

Россия, 142290, Пущино

Список литературы

  1. Андреева Н. А., Кулаковская Т. В., Кулаковская Е. В., Кулаев И. С. Полифосфаты и экзополифосфатазы в цитозоле и митохондриях Saccharomyces cerevisiae при культивировании на глюкозе и этаноле в условиях гиперкомпенсации по фосфату // Биохимия. 2008. Т. 73. С. 80‒85.
  2. Andreeva N. A., Kulakovskaya T. V., Kulakovskaya E. V., Kulaev I. S. Polyphosphates and exopolyphosphatases in cytosol and mitochondria of Saccharomyces cerevisiae during growth on glucose or ethanol under phosphate surplus // Biochemistry (Moscow). 2008. V. 73. P. 65‒69.
  3. Вагабов В. М., Трилисенко Л. В., Кочеткова О. Ю., Ильченко А. П., Кулаев И. С. Влияние m-хлоркабонилцианидфенилгидразона на синтез неорганических полифосфатов Saccharomyces cerevisiae в разных условиях роста // Микробиология. 2011. Т. 80. С. 18‒23.
  4. Vagabov V. M., Trilisenko L. V., Kochetkova O. Y., Ilchenko A. P., Kulaev I. S. Effect of m-carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone on inorganic polyphosphates synthesis in Saccharomyces cerevisiae under different growth conditions // Microbiology (Moscow). 2011. V. 80. P. 15–20.
  5. Розанов А. С., Котенко А. В., Акбердин И. Р., Пельтек С. Е. Рекомбинантные штаммы Saccharomyces cerevisiae для получения этанола из растительной биомассы // Вавиловский журнал генетики и селекции. 2014. Т. 18. С. 989‒998.
  6. Трилисенко Л. В., Валиахметов А. Я., Кулаковская Т. В. Физиологические особенности Saccharomyces cerevisiae при сверхэкспрессии полифосфатазы Pрх1 // Микробиология. 2023. Т. 92. С. 396–403.
  7. Trilisenko L. V., Valiakhmetov A.Ya., Kulakovskaya T. V. Physiological characteristics of Saccharomyces cerevisiae strain overexpressing polyphosphatase Ppx1 // Microbiology (Moscow). 2023. V. 92. P. 545‒551.
  8. Эльдаров М. А., Кишковская С. А., Танащук Т. Н., Марданов А. В. Геномика и биохимия винных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Успехи биологической химии. 2016. Т. 56. С. 155–196.
  9. Andreeva N., Ledova L., Ryazanova L., Tomashevsky A., Kulakovskaya T., Eldarov M. Ppn2 endopolyphosphatase overexpressed in Saccharomyces cerevisiae: comparison with Ppn1, Ppx1, and Ddp1 polyphosphatases // Biochimie. 2019. V. 163. P. 101‒107.
  10. Andreeva N., Ryazanova L., Ledova L., Trilisenko L., Kulakovskaya T. Stress resistance of Saccharomyces cerevisiae strains overexpressing yeast polyphosphatases // Stresses. 2022. V. 2. P. 17–25.
  11. Auesukaree C. Molecular mechanisms of the yeast adaptive response and tolerance to stresses encountered during ethanol fermentation // J. Biosci. Bioeng. 2017. V. 124. P. 133–142.
  12. Bubis J. A., Spasskaya D. S., Gorshkov V. A., Kjeldsen F., Kofanova A. M., Lekanov D. S., Gorshkov M. V., Karpov V. L., Tarasova I. A., Karpov D. S. Rpn4 and proteasome-mediated yeast resistance to ethanol includes regulation of autophagy // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2020. V. 104. P. 4027‒4041.
  13. Denoncourt A., Downey M. Model systems for studying polyphosphate biology: a focus on microorganisms // Curr. Genet. 2021. V. 67. P. 331–346.
  14. Eskes E., Deprez M. A., Wilms T., Winderickx J. pH homeostasis in yeast; the phosphate perspective // Curr. Genet. 2018. V. 64. P. 155‒161.
  15. Ghillebert R., Swinnen E., De Snijder P., Smets B., Winderickx J. Differential roles for the low-affinity phosphate transporters Pho87 and Pho90 in Saccharomyces cerevisiae // Biochem. J. 2011. V. 434. P. 243‒251.
  16. Kulakovskaya E., Zvonarev A., Kulakovskaya T. PHM6 and PHM7 genes are essential for phosphate surplus in the cells of Saccharomyces cerevisiae // Arch. Microbiol. 2023. V. 205. Art. 47.
  17. Ma M., Liu Z. L. Mechanisms of ethanol tolerance in Saccharomyces cerevisiae // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2010. V. 87. P. 829‒845.
  18. Rao N. N., Gómez-García M.R., Kornberg A. Inorganic polyphosphate: essential for growth and survival // Annu. Rev. Biochem. 2009. V. 78. P. 605–647.
  19. Sahana G. R., Balasubramanian B., Joseph K. S., Pappuswamy M., Liu W.-C., Meyyazhagan A., Kamyab H., Chelliapan S., Biljo V. J. A review on ethanol tolerance mechanisms in yeast: current knowledge in biotechnological applications and future directions // Process Biochemistry. 2024. V. 138. P. 1‒13.
  20. Stanley D., Bandara A., Fraser S., Chambers P. J., Stanley G. A. The ethanol stress response and ethanol tolerance of Saccharomyces cerevisiae // J. Appl. Microbiol. 2010. V. 109. P. 13‒24.
  21. Vagabov V. M., Trilisenko L. V., Kulakovskaya T. V., Kulaev I. S. Effect of a carbon source on polyphosphate accumulation in Saccharomyces cerevisiae // FEMS Yeast Res. 2008. V. 8. P. 877‒882.
  22. Wolf I. R., Marques L. F., de Almeida L. F., Lázari L. C., de Moraes L. N., Cardoso L. H., Alves C. C.d.O., Nakajima R. T., Schnepper A. P., Golim M.d.A., et al. Integrative analysis of the ethanol tolerance of Saccharomyces cerevisiae // Int. J. Mol. Sci. 2023. V. 24. Art. 5646.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Рост штамма BY4741 (wt) на средах YP с 1% этанолом (1), 4% этанолом (2) и 7% этанолом (3).

Скачать (17KB)
3. Рис. 2. Рост штамма BY4741 (wt) и штаммов-нокаут мутантов по генам переносчиков фосфата на среде YP с 4% этанолом: 1 – wt; 2 – Δpho87; 3 – Δpho90; 4 – Δpho91; 5 – Δpho89.

Скачать (19KB)
4. Рис. 3. Концентрация фосфата в среде до культивирования (А) и после культивирования штаммов S. cerevisiae в среде YPD c 2% глюкозой (Б) и YP с 4% этанолом (B): 1 – штамм wt; 2 – штамм Δpho87. Статистическую значимость оценивали относительно данных для штамма wt с помощью t-критерия Стьюдента, используя стандартную программу Excel: В – p < 0.01; A и Б – разница статистически незначима.

Скачать (10KB)

© Российская академия наук, 2024

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».