Разработка и валидация методики количественного определения аторвастатина в клетках линии HepG2 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Введение. Полипептид, транспортирующий органические анионы, 1B1 (англ.: organic anion transporting polypeptide, OATP1B1) ― это белок-переносчик, который играет важную роль в фармакокинетике веществ, являющихся его субстратами, регулируя их проникновение в гепатоциты. Функциональная активность данного белка оценивается по транспорту маркерных субстратов, например, аторвастатина, на линиях клеток, гиперэкспрессирующих OATP1B1, таких как HepG2 (гепатоцеллюлярная карцинома человека).

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения аторвастатина в клетках линии HepG2 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим (МС/МС) детектированием.

Материалы и методы. Работа выполнена на ВЭЖХ-хроматографе с МС/МС детектором. Условия хроматографического анализа: предколонка Selectra C18 Guard Cartridges SLC-18GDC46-5UM, хроматографическая колонка UCT Selectra C18 4,6 mm × 100 mm 5 um, 100 А, скорость потока ― 0,3 мл/мин, термостатирование колонки 35°С. Объём вводимых проб ― 2 мкл, время анализа ― 10 мин. Использовался градиентный режим элюирования: соотношение раствора 0,1% муравьиной кислоты и ацетонитрила составило на 0 и 0,3 мин 35% и 65% соответственно; 0,6 и 5 мин ― 5% и 95%; 5,05 и 8 мин ― 35% и 65%. Время удерживания аторвастатина составило 4,53 мин. Условия детектирования аторвастатина: положительный режим ионизации; напряжение спрея ― 3500 В; режим детектирования ― мониторинг множественных реакций 559,30 m/z → 466,20 m/z, 559,30 m/z → 440,20 m/z; энергия столкновения ― 17 В, фрагментация источника ― 0; давление газа, индуцирующее диссоциацию, ― 2 мТорр.

Результаты. Разработанная биоаналитическая методика была валидирована по следующим параметрам: линейность, селективность, точность, прецизионность, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность образцов, матричный эффект. Подтверждённый диапазон методики в лизате клеток составил 0,5–200 нмоль/л.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения аторвастатина в лизате клеток линии HepG2 методом ВЭЖХ-МС/МС.