Влияние различных концентраций фибриногена на свойства фибриновой матрицы для тканевой сосудистой инженерии

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель. Тестирование фибриновых матриц, содержащих 10, 20 и 30 мг/мл фибриногена (фибрин-10, фибрин-20 и фибрин-30 соответственно) на возможность их применения в тканевой сосудистой инженерии (ТСИ).

Материалы и методы. Фибриноген выделяли методом этаноловой криопреципитации и полимеризовали с помощью тромбина и раствора СаСl2. Структуру фибрина изучали сканирующей электронной микроскопией, физико-механические свойства материала тестировали на испытательной машине Zwick/Roell. Метаболическую активность эндотелиальных клеток (ЭК) на поверхности фибрина оценивали МТТ-тестом, жизнеспособность фибробластов в толще фибрина и возможность миграции – с помощью флуоресцентной и световой микроскопии. Определен процент усадки фибрина по изменению объема образцов до и после удаления влаги.

Результаты. Диаметр волокон всех образцов фибринов не различался, при этом размер пор в фибрине-30 был меньше по сравнению с фибрином-10 и фибрином-20. Подтверждена возможность миграции фибробластов в толщу фибриновой матрицы и сохранение жизнеспособности клеток от 97 до 100% на глубине 5 мм. Метаболическая активность ЭК на поверхности фибрина-20 и фибрина-30 превышала коллаген, фибронектин и фибрин-10. Все образцы фибрина дали усадку объема до 95,5-99,5%, при этом усадка фибрина-10 была самой большой. Физико-механические свойства фибрина в 10 раз уступали a. mammaria человека.

Заключение. Фибрин с концентрацией фибриногена 20 и 30 мг/мл поддерживает высокую метаболическую и пролиферативную активность ЭК на поверхности, а также высокую жизнеспособность фибробластов в толще. Доступность, простота получения и наличие ряда благоприятных свойств делают фибрин перспективным материалом для ТСИ. Однако, проблема недостаточной прочности требует дальнейших исследований.

Об авторах

Вера Геннадьевна Матвеева

ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Автор, ответственный за переписку.
Email: matveeva_vg@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4146-3373
SPIN-код: 9914-3705
ResearcherId: I-9475-2017

к.м.н., с.н.с. лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины, ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Россия, Кемерово

Марьям Юрисовна Ханова

ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Email: khanovam@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-8826-9244
SPIN-код: 5923-0432
ResearcherId: AAR-7341-2020

м.н.с. лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины, ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Россия, Кемерово

Татьяна Владимировна Глушкова

ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Email: bio.tvg@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-4890-0393
SPIN-код: 3151-6002
ResearcherId: H-7659-2017

к.б.н., н.с. лаборатории новых биоматериалов отдела экспериментальной медицины, ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Россия, Кемерово

Лариса Валерьевна Антонова

ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Email: antonova.la@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-8874-0788
SPIN-код: 8634-3286
ResearcherId: I-8624-2017

д.м.н., зав. лабораторией клеточных технологий отдела экспериментальной медицины, ФГБНУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний

Россия, Кемерово

Список литературы

  1. Best C., Strouse R., Hor K., et al. Toward a patient-specific tissue engineered vascular graft // Journal of Tissue Engineering. 2018. Vol. 9. doi:10.1177/ 2041731418764709
  2. Антонова Л.В., Севостьянова В.В., Сейфалиан А.М., и др. Сравнительное тестирование in vitro биодеградируемых сосудистых имплантов для оценки перспективы использования в тканевой инженерии // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2015. №4. C. 34-41.
  3. Ravi S., Chaikof E.L. Biomaterials for vascular tissue engineering // Regenerative Medicine. 2010. Vol. 5, №1. P. 107-120. doi: 10.2217/rme.09.77
  4. Park C.H., Woo K.M. Fibrin-Based Biomaterial Applications in Tissue Engineering and Regenerative Medicine. In: Noh I., editor. Biomimetic Medical Materials From Nanotechnology to 3D Bioprinting. Advances in Experimental Medicine and Biology. Seoul, South Korea: Springer Nature Singapore Pte Ltd.; 2018. Vol. 1064. P. 253-261. doi: 10.1007/978-981-13-0445-3_16
  5. Barsotti M.C., Magera A., Armani C., et al. Fibrin acts as biomimetic niche inducing both differentiation and stem cell marker expression of early human endothelial progenitor cells // Cell Proliferation. 2011. Vol. 44, №1. P. 33-48. doi:10.1111/ j.1365-2184.2010.00715.x
  6. Chiu C.L., Hecht V., Duong H., et al. Permeability of three-dimensional fibrin constructs corresponds to fibrinogen and thrombin concentrations // Bio Research Open Access. 2012. Vol. 1, №1. P. 34-40. doi: 10.1089/biores.2012.0211
  7. Li W., Sigley J., Pieters M., et al. Fibrin Fiber Stiffness Is Strongly Affected by Fiber Diameter, but Not by Fibrinogen Glycation // Biophysical Journal. 2016. Vol. 110, №6. P. 1400-1410. doi: 10.1016/j.bpj.2016.02.021
  8. Aper T., Wilhelmi M., Gebhardt C., et al. Novel method for the generation of tissue-engineered vascular grafts based on a highly compacted fibrin matrix // Acta Biomaterialia. 2016. Vol. 29. P. 21-32. doi: 10.1016/j.actbio.2015.10.012
  9. Матвеева В.Г., Ханова М.Ю., Великанова Е.А., и др. Возможность получения и характеристика колониеформирующих эндотелиальных клеток из периферической крови пациентов с ишемической болезнью сердца // Цитология. 2018. Т. 60, №8. C. 598-608. doi: 10.31116/tsitol.2018.08.03
  10. Weisel J.W., Litvinov R.I. Mechanisms of fibrin polymerization and clinical implications // Blood. 2013. Vol. 121, №10. P. 1712-1719. doi:10.1182/ blood-2012-09-306639
  11. Profumo A., Turci M., Damonte G., et al. Kinetics of fibrinopeptide release by thrombin as a function of CaCl2 concentration: different susceptibility of FPA and FPB and evidence for a fibrinogen isoform-specific effect at physiological Ca2+ concentration // Biochemistry. 2003. Vol. 42, №42. P. 12335-12348. doi: 10.1021/bi034411e
  12. Chen H., Kassab G.S. Microstructure-based biomechanics of coronary arteries in health and disease // Journal of Biomechanics. 2016. Vol. 49, №12. P. 2548-2559. doi: 10.1016/j.jbiomech.2016.03.023
  13. Aper T., Teebken O.E., Steinhoff G., et al. Use of a fibrin preparation in the engineering of a vascular graft model // European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 2004. Vol. 28, №3. P. 296-302. doi: 10.1016/j.ejvs.2004.05.016
  14. Kim D.-H., Han K., Gupta K., et al. Mechano-sensitivity of fibroblast cell shape and movement to anisotropic substratum topography gradients // Bio-materials. 2009. Vol. 30, №29. P. 5433-5444. doi: 10.1016/j.biomaterials.2009.06.042
  15. Leon-Valdivieso C.Y., Wedgwood J., Lallana E., et al. Fibroblast migration correlates with matrix softness. A study in knob-hole engineered fibrin // APL Bioengineering. 2018. Vol. 2, №3. P. 036102. doi: 10.1063/1.5022841
  16. Sternlicht M.D., Werb Z. How matrix metallo-proteinases regulate cell behavior // Annual Review of Cell and Developmental Biology. 2001. Vol. 17. P. 463-516. doi: 10.1146/annurev.cellbio.17.1.463
  17. Raeber G.P., Lutolf M.P., Hubbell J.A. Molecularly engineered PEG hydrogels: a novel model system for proteolytically mediated cell migration // Biophysical Journal. 2005. Vol. 89, №2. P. 1374-1388. doi: 10.1529/biophysj.104.050682
  18. Li Y., Meng H., Liu Y., et al. Fibrin Gel as an Injectable Biodegradable Scaffold and Cell Carrier for Tissue Engineering // The Scientific World Journal. 2015. Vol. 2015. P. 685690. doi:10.1155/ 2015/685690
  19. Moreira R., Neusser C., Kruse M., et al. Tissue-Engineered Fibrin-Based Heart Valve with Bio-Inspired Textile Reinforcement // Advanced Healthcare Materials. 2016. Vol. 5, №16. P. 2113-2121. doi: 10.1002/adhm.201600300
  20. Tschoeke B., Flanagan T.C., Cornelissen A., et al. Development of a composite degradable/non-degradable tissue-engineered vascular graft // Artificial Organs. 2008. Vol. 32, №10. P. 800-809. doi: 10.1111/j.1525-1594.2008.00601.x
  21. Flanagan T.C., Cornelissen C., Koch S., et al. The in vitro development of autologous fibrin-based tissue-engineered heart valves through optimised dynamic conditioning // Biomaterials. 2007. Vol. 28, №23. P. 3388-3397. doi: 10.1016/j.biomaterials. 2007.04.012

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 2. Жизнеспособность фибробластов на поверхности (верх) и на глубине 5 мм (низ) через 7 и 14 сут культивирования

Скачать (159KB)
3. Рис. 3. Фотографии фибробластов на поверхности и в толще фибрина на 14 сут культивирования (световая микроскопия, ув. × 100)

Скачать (576KB)
4. Рис. 4. Результаты МТТ-теста на различных поверхностях

Скачать (90KB)

© ООО "Эко-Вектор", 2021


 


Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».