Оптимальный срок фиксации комбинированной биоконструкции с клетками буккального эпителия при лимбально-клеточной недостаточности в эксперименте

Актуальность. Поиск эффективного метода лечения недостаточности стволовых клеток лимба различной этиологии, приводящей к интенсивному помутнению и васкуляризации роговицы с последующим значительным снижением остроты зрения, остаётся важной и актуальной темой в офтальмологии. Результаты проведённых исследований показали, что трансплантация буккальных эпителиальных клеток может значительно улучшить прогноз лечения данной категории пациентов.

Цель — в эксперименте определить оптимальный срок фиксации комбинированной биоконструкции с клетками буккального эпителия при лечении лимбально-клеточной недостаточности.

Материалы и методы. На первом этапе на глазах экспериментальных животных (12 глаз) удаляли скребцом эпителий роговицы и по всей окружности лимб. Далее для выделения эпителиальных буккальных клеток и изготовления комбинированной биоконструкции, состоящей из буккальных клеток, коллагенового носителя и мягкой контактной линзы, со щеки кроликов забирали лоскут слизистой оболочки 5 × 5 мм. На втором этапе после формирования на роговице фиброваскулярного паннуса его иссекали до прозрачных слоёв роговицы, сверху размещали комбинированную биоконструкцию. Далее на границе внутренней и наружной трети век накладывали один П-образный шов. Временная блефарорафия сохранялась в течение 3 (6 глаз) и 5 сут (6 глаз), по истечении указанного времени снимали швы с век и удаляли биоконструкции. Удалённые с глаз лабораторных животных биоконструкции окрашивали витальным (прижизненным) флуорохромным красителем на основе трипафлавина и акридинового оранжевого, с последующим анализом во флуоресцентном микроскопе. Оценивали структуру клеточных ядер, общую целостность цитоплазмы, наличие секреторных везикул. Через 7 и 14 сут после трансплантации биоконструкции оценивали площадь эрозии, выраженность новообразованных сосудов и прозрачность роговицы. После завершения наблюдения кроликов выводили из эксперимента, глаза энуклеировали и подвергали гистологическому исследованию.

Результаты. На поверхности всех экспериментальных образцов биоконструкций, удалённых через 5 сут, выявлялись только лейкоциты. В то же время на образцах коллагенового носителя биоконструкций, удалённых через 3 сут, помимо лейкоцитов присутствовали и клетки буккального эпителия с нормальной структурой ядра и топографией хроматина в его составе, а также с секреторными везикулами. На 7-е и 14-е сутки зарегистрировано уменьшение площади эрозии в обеих группах, однако в группе с фиксацией биоконструкции в течение 5 сут отмечалась более выраженная тенденция к восстановлению глазной поверхности.

Заключение. По результатам прижизненного окрашивания флуорохромным красителем комбинированных биоконструкций, удалённых с роговицы экспериментальных животных через 3 и 5 сут после поверхностной кератэктомии, а также клинической картины в послеоперационном периоде и данным гистологического исследования установлен оптимальный срок фиксации биоконструкции равный 5 сут.