Новые штаммы дрожжей pichia pastoris - продуценты гетерологичных белков

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Дрожжи Pichia pastoris используются для синтеза множества рекомбинантных белков. Широкое применение этого вида дрожжей в биотехнологии обусловлено относительной простотой культивирования, дешевизной используемых сред и возможностью осуществления посттрансляционных модификаций белков. Основными способами повышения выхода рекомбинантного белка являются увеличение числа копий генов, кодирующих исследуемый белок, а также коэкспрессия вспомогательных факторов, участвующих в фолдинге, созревании и секреции белка. Необходимым условием для применения этих подходов является расширение коллекции ауксотрофных мутантов. В ходе данной работы была создана коллекция плазмид и штаммов, позволяющая осуществлять множественную интеграцию чужеродных генов в геном P. pastoris.

Об авторах

Дмитрий Михайлович Музаев

Санкт-Петербургский государственный университет

Email: dmmuzaev@yandex.ru
магистр, кафедра генетики и биотехнологии

Андрей Михайлович Румянцев

Санкт-Петербургский государственный университет

Email: rumyantsev-am@mail.ru
магистр, кафедра генетики и биотехнологии

Елена Викторовна Самбук

Санкт-Петербургский государственный университет

Email: esambuk@mail.ru
д. б. н., профессор, кафедра генетики и биотехнологии

Марина Владимировна Падкина

Санкт-Петербургский государственный университет

Email: mpadkina@mail.ru
д. б. н., профессор, кафедра генетики и биотехнологии

Список литературы

  1. Brierley R. A. (1998) Secretion of recombinant human insulin-like growth factor (IGF-1). Methods in Molecular Biology: Pichia Protocols, Humana Press, Totowa, NJ. V. 103: P. 149-177.
  2. Cregg J. M., Cereghino J. L., Shi J. Y., Higgins D. R. (2000) Recombinant protein expression in Pichia pastoris. Mol Biotechnol. V. 16: P. 23-52.
  3. Darby R. A., Cartwright S. P., Dilworth M. V., Bill R. M. (2012) Yeast Species Shall I Choose? Saccharomyces cerevisiae Versus Pichia pastoris (Review). Recombinant Protein Production in Yeast: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. V. 866: P. 11-23.
  4. Guthrie C., Fink G. R. (1991) Guide to yeast genetics and molecular biology. Academic Press. V. 3: P. 194-933.
  5. Higgins D. R., Busser K., Comiskey J., Whittier P. S., Purcell T. J., Hoeffler J. P. (1998) Small vectors for expression based on dominant drug resistance with direct multicopy selection. Methods in Molecular Biology: Pichia Protocols, Humana Press, Totowa, NJ. V. 103: P. 41-53.
  6. Littlewood B. S. (1972) A method for obtaining antibiotic-sensitive mutants in Saccharomyces cerevisiae. Genetics. V. 71 (2): P. 305-308.
  7. Scorer C. A., Clare J. J., McCombie W. R., Romanos M. A., Sreekrishna K. (1994) Rapid selection using G418 of high copy number transformants of Pichia pastoris for high-level foreign gene expression. BioTechnology. V. 12: P. 181-184.
  8. Sambrook J., Russel D. W. (2001) Molecular cloning: A laboratory manual, 3d edition. New York: Cold Spring Harbour Laboratory Press.
  9. Sherman F. (1997) Yeast genetics. The encyclopedia of molecular biology and molecular medicine. V. 6: P. 302-325.
  10. Sunga A. J., Cregg J. M. (2004) The Pichia pastoris formaldehyde dehydrogenase gene (FLD1) as a marker for selection of multicopy expression strains of P. pastoris. Gene. V. 330: P. 39-47.
  11. GenBank. Komagataella pastoris GS115. Reference genome sequence. Cited 19.12.2014. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/338?genome_assembly_id=28698.
  12. Pichia pastoris Genome Browser. Genome Database of the Pichia pastoris. Cited 19.12.2014. URL: http://www.pichiagenome.org/.
  13. Lin Cereghino G. P., Lin Cereghino J., Sunga A. J., Johnson M. A., Lima M., Gleeson M. A. G., Cregg J. M. (2000) New selectable marker/auxotrophic host strain combinations for molecular genetic manipulation of Pichia pastoris. Gene. V. 263: P. 159-169.
  14. Scherer S., Davis R. W. (1979) Replacement of chromosome segments with altered DNA sequences constructed in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. V. 76: P. 4951-4955.

© Музаев Д.М., Румянцев А.М., Самбук Е.В., Падкина М.В., 2015

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
 


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах