DEVELOPMENT OF A MEDICINAL AGENT BASED ON THE PEPTIDE ANTAGONIST OF OREXIN RECEPTOR FOR SUPPRESSION OF ALCOHOL DEPENDENCE


Cite item

Full Text

Open Access Open Access
Restricted Access Access granted
Restricted Access Subscription Access

Abstract

The aims of the research were to synthesize gene, coding previously designed artificial protein antorex - the antagonist of orexins receptor OxR1, to explore it's expression in Escherichia coli cells and to develop the process of this protein purification from Escherichia coli cell lysates. Methods of chemical and enzymatic DNA synthesis, genetic engineering, selection and chromatography were used. The gene coding antorex protein was synthesized, the plasmid DNA рЕТ-antorex, containing this gene and Escherichia coli strain BL21(pЕT-аntorex) - the stable producer of recombinant protein antorex were obtained. Methods of Escherichia coli producer strain cultivation and antorex protein purification with the use of reverse-phase and ion-exchange chromatography was developed. Large-scale cultivation of producer strain was performed in 10L fermenter and the pilot lot of 480 mg of antorex protein with the purity of 97,5% was produced. The developed methods lead to production and purification of antorex artificial protein for conducting pre-clinical and clinical trials.

About the authors

I V Duhovlinov

Institute of Experimental Medicine

N A Klimov

Institute of Experimental Medicine

E A Fedorova

Institute of Experimental Medicine

Yu V Zherebcova

Institute of Experimental Medicine

E A Chernyaeva

Institute of Experimental Medicine

A I Orlov

Institute of Experimental Medicine

References

  1. Sakurai Т. Reverse pharmacology of orexin: from an orphan GPCR to integrative physiology // Regulatory peptides. 2005. Vol. 126, No 1. Р. 3-10.
  2. DiLeone R.J., Georgescu D., Nestler E.J. Lateral hypothalamic neuropeptides in reward and drug addiction // Life Sci. 2003. Vol. 73, No 6. P. 759-768.
  3. Paneda C., Winsky-Sommerer R., Boutrel B., de Lecea L. The corticotropin-releasing factor hypocretin connection: implications in stress response and addiction // Drug News Perspect. 2005. Vol. 18, No 4. P. 250-255.
  4. Harris G.C., Wimmer M., Aston J.G. A role for lateral hypothalamic orexin neurons in reward seeking // Nature. 2005. Vol. 437, No 7058. P. 556-559.
  5. Borgland S.L., Taha S.A., Sarti F., Fields H.L., Bonci A. Orexin A in the VTA is critical for the induction of synaptic plasticity and behavioral sensitization to cocaine // Neuron. 2006. Vol. 49, No 4. P. 589-601.
  6. Pasumarthi R.K., Reznikov L.R., Fadel J. Activation of orexin neurons by acute nicotine // Eur. J. Pharmacol. 2006. Vol. 535, No 1-3. P. 172-176.
  7. Narita M., Nagumo Y., Hashimoto S., Narita M., Khotib J., Miyatake M., Sakurai T., Yanagisawa M., Nakamachi T., Shioda S., Suzuki T. Direct involvement of orexinergic systems in the activation of the mesolimbic dopamine pathway and related behaviors induced by morphine // J. of Neurosci. 2006. Vol. 26, No 2. P. 398-405.
  8. Majumder K. Ligation-free gene synthesis by PCR: synthesis and mutagenesis at multiple loci of a chimeric gene encoding OmpA signal peptide and hirudin // Gene. 1992. Vol. 110, No 1. P. 89-94.
  9. Laemmly U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
  10. Studier F.W. Stable expression clones and auto-induction for protein production in E. coli // Methods Mol Biol. 2014. Vol. 1091, No 1. P. 17-32.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2017 Duhovlinov I.V., Klimov N.A., Fedorova E.A., Zherebcova Y.V., Chernyaeva E.A., Orlov A.I.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».