EFFECT OF HEAT-INDUCED ANTIGEN RETRIEVAL PROCEDURE ON DNA FLUORESCENT STAINING QUALITY IN HISTOLOGIC SECTIONS


Cite item

Full Text

Open Access Open Access
Restricted Access Access granted
Restricted Access Subscription Access

Abstract

The heat-induced epitope retrieval procedure is an important step in the procedure of immunofluorescent staining of tissues fixed in formalin-containing solutions. Generally, apart from the detection of the examined antigen, the staining of cell nuclei w ith appropriate fluorescent dyes is also carried out during the morphological studies. This procedure is used to identify the cells position and form, the phase of the mitotic cycle, the size of the nucleus and the nucleolus, the chromatin condition. The aim of our study is to investigate the effects of heat-induced epitope retrieval (HIER) procedure on the quality of DNA staining by fluorescent dyes DAPI and 7-Aminoactinomycin D. We have found that the potential effect of the HIER procedure on the stability and intensity of cell nuclei fluorescence staining should be taken into account in selecting a protocol for immunofluorescence antigen identification during a morphological study. Data obtained in the course of this study should be taken into account when carrying out a multicolor fluorescence and confocal laser microscopy.

About the authors

E A Kolos

FSBSI “Institute of Experimental Medicine”

D E Korzhevskii

FSBSI “Institute of Experimental Medicine”

References

  1. Baker-Cairns B., Meyers K, Hamilton R., Smith C., Tornatore C. Immunohistochemical staining of fixed tissue using antigen retrieval and a thermal cycler // Biotechniques. 1996. Vol. 20, No 4. Р. 641-650.
  2. Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Петрова Е.С., Карпенко М.Н., Григорьев И.П., Сухорукова Е.Г., Колос Е.А., Гиляров А.В. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии: руководство. 2-е изд., испр. и доп. / под ред. Д.Э. Коржевского. СПб.: СпецЛит, 2014. 118 с. [Korzhevskij D.Eh., Kirik O.V., Petrova E.S., Karpenko M.N., Grigor'ev I.P., Suhorukova E.G., Kolos E.A., Gilyarov A.V. Teoreticheskie osnovy i prakticheskoe primenenie metodov im-munogistohimii: rukovodstvo. 2-e izd., ispr. i dop. / pod red. D.Eh. Korzhevskogo. St. Petersburg: SpecLit, 2014. 118 р.].
  3. Shi S-R, Cote R.J., Taylor C.R. Antigen retrieval immunohistochemistry: past, present, and future // J. Histochem. Cytochem. 1997. Vol. 45. Р. 327-343.
  4. Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Сухорукова Е.Г., Колос Е.А., Карпенко М.Н., Суфиева Д.А., Назаренкова А.В. Молекулярная морфология. Методы флуоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии. СПб.: СпецЛит, 2014. 112 с. [Korzhevskij D.Eh., Kirik O.V., Suhorukova E.G., Kolos E.A., Karpenko M.N., Sufieva D.A., Nazarenkova A.V. Molekulyarnaya morfologiya. Metody fluorescentnoj i konfokal'noj lazernoj mikroskopii. St. Petersburg: SpecLit, 2014. 112 р.].
  5. Paulsen I.M.S., Dimke H, Frische S. A single simple procedure for dewaxing, hydration and heat-induced epitope retrieval (hier) for immunohistochemistry in formalin-fixed paraffin-embedded tissue // Eur. J. Histochem. 2015. Vol. 59, No 4. Р. 2532. doi: 10.4081/ejh.2015.2532.
  6. Baschong W, Suetterlin R, Laeng R.H. Control of autofluorescence of archival formaldehyde-fixed, paraffin-embedded tissue in confocal laser scanning microscopy (CLSM) // J. Histochem. Cytochem. 2001. Vol. 49. Р. 1565-1571.
  7. Long D.J. II, Buggs C. Microwave oven-based technique for immunofluorescent staining of paraffin-embedded tissues // J. Mol. Histol. 2008. Vol. 39, No 1. Р. 1$4.
  8. Robertson D., Savage K, Reis-Filho J.S., Isacke C.M. Multiple immunofluorescence labelling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue // BMC Cell Biol. 2008. Vol. 9, No 13. doi: 10.1186/1471- 2121-9-13.
  9. Zheng L, Schwartz C, Magidson V, Khodjakov A., Oliferenko S. The spindle pole bodies facilitate nuclear envelope division during closed mitosis in fission yeast // PLoS Biol. 2007. Vol. 5, No 7. Р. e170. doi.org/10.1371/journal.pbio.0050170.
  10. Kolthur-Seetharam U, Pradeepa M.M., Gupta N, Narayanaswamy R, Rao M.R. Spatiotemporal organization of AT- and GC-rich DNA and their association with transition proteins TP1 and TP2 in rat condensing spermatids // J. Histochem. Cytochem. 2009. Vol. 57, No 10. Р. 951-962.
  11. Maninova M, Vomastek T. Dorsal stress fibers, transverse actin arcs, and perinuclear actin fibers form an interconnected network that induces nuclear movement in polarizing fibroblasts // FEBS J. 2016. Vol. 283, No 20. Р. 3676-3693.
  12. Eidet J.R., Pasovic L, Maria R., Jackson C.J., Utheim T.P. Objective assessment of changes in nuclear morphology and cell distribution following induction of apoptosis // Diagn. Pathol. 2014. Vol. 9, No 92. doi: 10.1186/1746-1596-9-92.
  13. Тютина K.B., Скопичев В.Г., Боголюбов Д.С., Боголюбова И.О. Структурно-функциональная организация ядер секреторных клеток молочной железы у лактирующих и нелактирующих крыс // Ц и-тология. 2016. Т. 58, No 2. С. 143-149. [Tyutina K.V., Skopichev V.G., Bogolyubov D.S., Bogolyubova I.O. Strukturno-funkcional'naya organizaciya yader sekretornyh kletok molochnoj zhelezy u laktiruyushchih i nelaktiruyushchih krys. Citologiya, 2016, Vol. 58, No 2, рр. 143-149].
  14. Shi S-R, Cote R.J., Wu L, Liu C, Datar R, Shi Y., Liu D, Lim H, Taylor C.R. DNA extraction from archival formalinfixed, paraffin-embedded tissue sections based on the antigen retrieval principle: heating under the influence of pH // J. Histochem. Cytochem. 2002. Vol. 50. Р. 1005-1011.
  15. Коржевский Д.Э., Сухорукова Е.Г., Гилерович Е.Г., Петрова Е.С., Кирик О.В., Григорьев И.П. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуногистохимических исследований и конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. 2013. Т. 143, No 2. С. 81-85. [Korzhevskij D.Eh., Suhorukova E.G., Gilerovich E.G., Petrova E.S., Kirik O.V., Grigor'ev I.P. Preimushchestva i nedostatki cink-ehtanol-formal'degida kak fiksatora dlya immunogistohimicheskih issledovanij i konfokal'noj lazernoj mikroskopii, Morfologiya. 2013. Vol. 143, No 2, рр. 81-85].
  16. Dolman N.J, Kilgore J.A., Davidson MW. A review of reagents for fluorescence microscopy of cellular compartments and structures, part I: BacMam labeling and reagents for vesicular structures // Curr. Protoc. Cytom. 2013. Vol. 66: Unit 12.30. doi: 10.1002/0471142956.cy1230s65.
  17. Kilgore J.A., Dolman N.J., Davidson MW. A review of reagents for fluorescence microscopy of cellular compartments and structures, Part II: reagents for non-vesicular organelles // Curr. Protoc. Cytom. 2013. Vol. 66. Unit 12.31. doi: 10.1002/0471142956.cy1231s66.
  18. Сырцова M.A., Колос Е.А., Снегова B.A., Гусельникова В.В. Применение различных флуорес центных красителей для окраски ядер клеток в фиксированном биологическом материале // Медицинский академический журнал. 2014. Т. 14, № 2. С. 34-39. [Syrcova M.A., Kolos E.A., Snegova V.A., Gusel'nikova VV. Primenenie razlichnyh fluorescentnyh krasitelej dlya okraski yader kletok v fiksirovannom biologicheskom materiale. Medicinskij akademicheskij zhurnal, 2014, Vol. 14, No 2, рр. 34-39].
  19. Петрова Е.С., Исаева Е.Н., Коржевский Д.Э. МСК костного мозга крысы могут дифференцироваться в жировые к летки после аллотрансплантации в поврежденный седалищный нерв // Нейронаука для медицины и психологии: сб. / под ред. Е.В. Лосевой, А.В. Крючковой, Н.А. Логиновой. М.: МАКС Пресс, 2016. C. 328-329. [Petrova E.S., Isaeva E.N., Korzhevskij D.Eh. MSK kostnogo mozga krysy mogut differencirovat'sya v zhirovye kletki posle allotransplantacii v povrezhdennyj sedalishchnyj nerv, Nejronauka dlya mediciny i psihologii: sb. / pod red. E.V. Losevoj, A.V. Kryuchkovoj, N.A. Loginovoj. Moscow: MAKS Press, 2016, рр. 328-329].
  20. Nam S.K., Im J., Kwak Y, Han N, Nam K.H., Seo A.N., Lee H.S. Effects of fixation and storage of human tissue samples on nucleic Acid preservation // Korean J. Pathol. 2014. Vol. 48, No 1. P. 36-42.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2018 Kolos E.A., Korzhevskii D.E.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».