Получение и характеризация псевдовирусов SARS-CoV-2

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Обоснование. Технология псевдовирусов — универсальный и ценный инструмент для фундаментальных и прикладных вирусологических исследований. Псевдотипированные вирусы обеспечивают тот же механизм проникновения в клетку, что и SARS-CoV-2, поэтому они широко используются для изучения механизма проникновения вируса, клеточного тропизма, а также для проведения анализа вируснейтрализации.

Цель работы — получить псевдотипированные вирусы SARS-CoV-2 и оценить их трансдуцирующую активность.

Материалы и методы. С помощью методов генетической инженерии получали генетическую конструкцию, несущую ген гликопротеина S SARS-CoV-2, а также репортерную плазмиду pLenti-Luc-GFP, кодирующую гены зеленого флуоресцентного белка (GFP) и люциферазы светлячка. С помощью трансфекции эукариотических клеток были наработаны псевдовирусные частицы. Трансдуцирующая активность псевдовирусных частиц, экспонирующих на своей поверхности гликопротеин S SARS-CoV-2, изучена с использованием культур клеток HEK293, HEK293-hACE2 и HEK293-hACE2-TMPRSS2 (t).

Результаты. На основе лентивирусной платформы второго поколения получены псевдовирусы, экспонирующие на своей поверхности гликопротеин S SARS-CoV-2. Установлено, что псевдовирусы более эффективно проникают в клетки HEK293-hACE2-TMPRSS2, чем в HEK293-hACE2. Показано, что псевдовирусы чувствительны к нейтрализации рекомбинантными моноклональными антителами, которые взаимодействуют с рецептор-связывающим доменом (RBD) гликопротеина S SARS-CoV-2.

Заключение. Полученные и охарактеризованные в данной работе псевдовирусы могут быть использованы как для поиска ингибиторов проникновения SARS-CoV-2 в клетки-мишени, так и для оценки эффективности разрабатываемых моноклональных антител и вакцин против SARS-CoV-2.

Об авторах

Надежда Борисовна Рудометова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Автор, ответственный за переписку.
Email: nadenkaand100@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1684-9071
SPIN-код: 5283-6608

канд. биол. наук, научный сотрудник

Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область

Дмитрий Николаевич Щербаков

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: dnshcherbakov@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-8023-4453
SPIN-код: 9616-0933
Scopus Author ID: 37027118800

канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник

Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область

Лариса Ивановна Карпенко

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: karpenko@vector.nsc.ru
ORCID iD: 0000-0003-4365-8809
SPIN-код: 2026-5992
Scopus Author ID: 7005000410

д-р биол. наук, доцент, ведущий научный сотрудник

Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область

Список литературы

  1. Schmidt F., Weisblum Y., Muecksch F. et al. Measuring SARS-CoV-2 neutralizing antibody activity using pseudotyped and chimeric viruses // J. Exp. Med. 2020. Vol. 217, No. 11. P. e2020118. doi: 10.1084/jem.20201181
  2. Chen M., Zhang X.E. Construction and applications of SARS-CoV-2 pseudoviruses: a mini review // Int. J. Biol. Sci. 2021. Vol. 17, No. 6. P. 1574–1580. doi: 10.7150/ijbs.59184
  3. Neerukonda S.N., Vassell R., Herrup R. et al. Establishment of a well-characterized SARS-CoV-2 lentiviral pseudovirus neutralization assay using 293T cells with stable expression of ACE2 and TMPRSS2 // PLoS One. 2021. Vol. 16, No. 3. P. 1–19. doi: 10.1371/journal.pone.0248348
  4. Yu J., Li Z., He X. et al. Deletion of the SARS-CoV-2 spike cytoplasmic tail increases infectivity in pseudovirus neutralization assays // J. Virol. 2021. Vol. 95, No. 11. P. 1–14. doi: 10.1128/JVI.00044-21
  5. Li Q., Liu Q., Huang W. et al. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses // Rev. Med. Virol. 2018. Vol. 28, No. 1. P. e1963. doi: 10.1002/rmv.1963
  6. Zhang H., Penninger J.M., Li Y. et al. Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) as a SARS-CoV-2 receptor: Molecular mechanisms and potential therapeutic target // Intensive Care Med. 2020. Vol. 46, No. 4. P. 586–590. doi: 10.1007/s00134-020-05985-9
  7. Hoffmann M., Kleine-Weber H., Schroeder S. et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor // Cell. 2020. Vol. 181, No. 2. P. 271–280.e8. doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Инфекционность псевдовирусных частиц, экспонирующих S-белок SARS-CoV-2, на клетках HEK293, HEK293-hACE2 и HEK293-hACE2-TMPRSS2 (t). Образцы тестировали в трех повторах, эксперимент проводили дважды. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение

Скачать (48KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Нейтрализация псевдовирусных частиц, экспонирующих на своей поверхности гликопротеин S SARS-CoV-2, моноклональными антителами при концентрации 1 мкг/мл. Образцы тестировали в трех повторах, эксперимент проводили дважды. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение

Скачать (39KB)
Метаданные

© Эко-Вектор, 2022



Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».