Исследование роли длинной некодирующей РНК ROX в поддержании комплекса дозовой компенсации у Drosophila melanogaster

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Белки MSL1, MSL2, MSL3, MLE, MOF и некодирующие РНК roX1 и roX2 формируют комплекс дозовой компенсации (КДК) дрозофилы, который специфично связывается с Х-хромосомой самцов. Известно, что некодирующие РНК roX являются обязательными компонентами КДК в процессах сборки и привлечения комплекса на Х-хромосому самцов. Однако до сих пор остается неясным, насколько необходима данная РНК для поддержания структуры уже собранного комплекса. В данной работе нами показано, что полный комплекс дозовой компенсации при воздействии РНКаз диссоциирует достаточно слабо: из комплекса эффективно освобождается хеликаза MLE, а остальные белковые компоненты, MSL1, MSL2 и MSL3, претерпевают частичную разборку и продолжают находиться в составе субкомплексов. Полученные результаты подтверждают важность некодирующей РНК roX2 не только в процессах инициации сборки КДК, но и на этапе поддержания структуры уже собранного комплекса.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

В. А. Бабоша

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук (ИБГ РАН)

Автор, ответственный за переписку.
Email: v.babosha@gmail.com
Россия, Москва

П. Г. Георгиев

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук (ИБГ РАН)

Email: v.babosha@gmail.com

академик РАН

Россия, Москва

О. Г. Максименко

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук (ИБГ РАН)

Email: maksog@mail.ru
Россия, Москва

Список литературы

  1. Samata M., Akhtar A. Dosage Compensation of the X Chromosome: A Complex Epigenetic Assignment Involving Chromatin Regulators and Long Noncoding RNAs // Annual Review of Biochemistry. 2018. Vol. 87. Dosage Compensation of the X Chromosome. № 1. P. 323–350.
  2. Kuroda M. I., Hilfiker A., Lucchesi J. C. Dosage Compensation in Drosophila-a Model for the Coordinate Regulation of Transcription // Genetics. 2016. V. 204. № 2. С. 435–450.
  3. Straub T., Grimaud C., Gilfillan G. D., et al. The chromosomal high-affinity binding sites for the Drosophila dosage compensation complex // PLoS genetics. 2008. V. 4. № 12. P. e1000302.
  4. Meller V. H., Rattner B. P. The roX genes encode redundant male-specific lethal transcripts required for targeting of the MSL complex // The EMBO Journal. 2002. V. 21. № 5. P. 1084–1091.
  5. Maenner S., Müller M., Fröhlich J., et al. ATP-dependent roX RNA remodeling by the helicase maleless enables specific association of MSL proteins // Molecular Cell. 2013. V. 51. № 2. P. 174–184.
  6. Ilik I. A., Quinn J. J., Georgiev P., et al. Tandem Stem Loops in roX RNAs Act Together to Mediate X Chromosome Dosage Compensation in Drosophila // Molecular cell. 2013. V. 51. № 2. P. 156–173.
  7. Li F., Schiemann A. H., Scott M. J. Incorporation of the noncoding roX RNAs alters the chromatin-binding specificity of the Drosophila MSL1/MSL2 complex // Molecular and Cellular Biology. 2008. V. 28. № 4. P. 1252–1264.
  8. Kelley R. L.,, Lee O.-K., Shim Y.-K. Transcription rate of noncoding roX1 RNA controls local spreading of the Drosophila MSL chromatin remodeling complex // Mechanisms of development. 2008. V. 125. № 11–12. P. 1009–1019.
  9. Morra R., Smith E. R., Yokoyama R., Lucchesi J. C. The MLE subunit of the Drosophila MSL complex uses its ATPase activity for dosage compensation and its helicase activity for targeting // Molecular and Cellular Biology. 2008. V. 28. № 3. P. 958–966.
  10. Johansson A.-M., Stenberg P., Larsson J. msl2 mRNA is bound by free nuclear MSL complex in Drosophila melanogaster // Nucleic Acids Research. 2011. V. 39. № 15. P. 6428–6439.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Выявление компонентов КДК в сахарозном градиенте 10–40%. (а) Лизат без обработки нуклеа- зой, с VNC. (б) Лизат, обработанный РНКазой А. (в) Лизат, обработанный РНКазой III. Иммуноблот-а- нализ проведен с антителами, специфично узнаю- щими белки MSL1, MSL2, MSL3, MLE. Цифрами отмечены номера собранных фракций от 1 до 13 (от «тяжелой» к «легкой»).

Скачать (445KB)
3. Рис. 2. (а) Результаты иммунопреципитации ядерных экстрактов, выделенных из культуры клеток S2, с антителами, специфично узнающими белки MSL2 и MSL3, или с иммуноглобулинами G кролика (отрицательный контроль). Экстракты проходили 3 вида обработки: 1) без нуклеаз, обработаны неспецифичным ингибитором РНКаз VNC, 2) с добавлением РНКазы А, 3) с добавлением РНКазы III. Иммунопреципитаты анализировались при помощи иммуноблот-анализа на присутствие белка MSL1 в образцах. ‘input’ – исходный экстракт; IP-MSL2 – образец после иммунопреципитации антителами, специфично узнающими белок MSL2; IP-MSL3 – образец после иммунопреципитации антителами, специфично узнающими белок MSL3; IP-IgG – образец после иммунопреципитации иммуноглобулинами G кролика. (б) Выявление РНК roX2 во фракциях, полученных после аналитического ультрацентрифугирования в сахарозном градиенте 10-40% ядерного экстракта из культуры клеток S2. Пунктирной линией отмечен уровень фона. Стандартные отклонения построены по результатам четырех измерений.

Скачать (438KB)

© Российская академия наук, 2024

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах