Метод комплементации белков для качественной и количественной оценки содержания hTERP в клетке


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Изучение функционирования белков в клетке невозможно без анализа их содержания в клетке. Наиболее используемый метод анализа вестерн-блоттингом не всегда может быть использован из-за невозможности получить антитела, специфично узнающие белок интереса. В то же время вестерн-блоттинг является полуколичественным методом анализа и не позволяет определить точное содержание белка в клетке. В данной работе мы применили метод комплементации белков для качественной и количественной оценки содержания белка hTERP в клетке. При помощи редактирования генома на С-конец белка hTERP был введен довесок HiBiT, комплементация которого с LgBiT восстанавливает активную люциферазу. В результате мы определили содержание белка hTERP в клетке линии НЕК293Т.

Об авторах

М. А. Шамонова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия

М. С. Корягина

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия

В. Л. Шляпина

Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия

О. А. Донцова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН; Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А. Н. Белозерского; Сколковский институт науки и технологий, центр молекулярной и клеточной биологии

Автор, ответственный за переписку.
Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия; Москва, Россия; Москва, Россия

М. П. Рубцова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия

Список литературы

  1. Levy M. Z., Allsop R. C., Futcher A. B., et al. Telomere end-replication problem and cell aging // Journal of Molecular Biology. 1992. Vol. 225, № 4. P. 951–960.
  2. Chow T. T., Zhao Y., Mak S. S., et al. Early and late steps in telomere overhang processing in normal human cells: the position of the final RNA primer drives telomere shortening // Genes & Development. 2012. Vol. 26, № 11. P. 1167–1178.
  3. Fumagalli M., Rossiello F., Clerici M., et al. Telomeric DNA damage is irreparable and causes persistent DNA-damage-response activation // Nat Cell Biol. 2012. Vol. 14, № 4. P. 355–365.
  4. de Lange T. Shelterin-Mediated Telomere Protection // Annual Review of Genetics. 2018. Vol. 52, № 1. P. 223–247.
  5. Liu D., O'Connor M.S., Qin J., et al. Telosome, a Mammalian Telomere-associated Complex Formed by Multiple Telomeric Proteins // Journal of Biological Chemistry. 2004. Vol. 279, № 49. P. 51338–51342.
  6. Harley C. B., Futcher A. B., Greider C. W. Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts // Nature. 1990. Vol. 345, № 6274. P. 458–460.
  7. Allsopp R. C., Vaziri H., Patterson C., et al. Telomere length predicts replicative capacity of human fibroblasts. // Proceedings of the National Academy of Sciences. 1992. Vol. 89, № 21. P. 10114–10118.
  8. Morin G. B. The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein that synthesizes TTAGGG repeats // Cell. 1989. Vol. 59, № 3. P. 521–529.
  9. Weng N. P., Levine B. L., June C. H., et al. Regulated expression of telomerase activity in human T lymphocyte development and activation // J. Exp. Med. 1996. Vol. 183, № 6. P. 2471–2479.
  10. Lu W.-Y., Forbes S. J. Telomerase Activity Links to Regenerative Capacity of Hepatocytes // Transplantation. 2018. Vol. 102, № 10. P. 1587–1588.
  11. Holt S. E., Shay J. W. Role of telomerase in cellular proliferation and cancer // J. Cell. Physiol. 1999. Vol. 180, № 1. P. 10–18.
  12. Yashima K., Maitra A., Rogers B. B., et al. Expression of the RNA component of telomerase during human development and differentiation // Cell Growth Differ. 1998. Vol. 9, № 9. P. 805–813.
  13. Rubtsova M., Naraykina J., Vasilkova D., et al. Protein encoded in human telomerase RNA is involved in cell protective pathways // Nucleic Acids Research. 2018.
  14. Pakhomova T., Moshareva M., Vasilkova D., et al. Role of RNA Biogenesis Factors in the Processing and Transport of Human Telomerase RNA // Biomedicines. 2022. Vol. 10, № 6. P. 1275.
  15. Rubtsova M., Dontsova O. How Structural Features Define Biogenesis and Function of Human Telomerase RNA Primary Transcript // Biomedicines. 2022. Vol. 10, № 7. P. 1650.
  16. Xi L., Cech T. R. Inventory of telomerase components in human cells reveals multiple subpopulations of hTR and hTERT // Nucleic Acids Res. 2014. Vol. 42, № 13. P. 8565–8577.
  17. Dixon A. S., Schwinn M. K., Hall M. P., et al. NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells // ACS Chem. Biol. 2016. Vol. 11, № 2. P. 400–408.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Российская академия наук, 2025

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».