Оценка морфологической структуры децеллюляризованной человеческой амниотической мембраны

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель – изучить морфологическую структуру лиофилизированной амниотической мембраны, предварительно подвергнутой децеллюляризации физическим методом.

Материал и методы. Экспериментальное исследование сохранности анатомической структуры лиофилизированной амниотической мембраны (АМ) было выполнено на четырех группах фрагментов амниотической мембраны. Первая группа – АМ, пропитанная глицерином и высушенная над силикагелем; вторая группа – АМ, пропитанная глицерином и обработанная ультразвуком, лиофилизированная; третья группа – АМ, обработанная ультразвуком и лиофилизированная; четвертая группа – нативная АМ, не консервированная.

Выполнено изучение биоматериала с помощью световой микроскопии и сканирующей электронной микроскопии.

Результаты. Физические методы воздействия на биологическую ткань ожидаемо оказывают влияние на жизнеспособность клеток и позволяют получить полностью децеллюляризованную амниотическую мембрану. Дополнительная обработка АМ глицерином перед физическим воздействием с целью децеллюляризации достоверно не способствует сохранению клеточных структур. При этом необходимо отметить, что в амниотической мембране, пропитанной глицерином, после физического воздействия сохраняется значимо больше фрагментов мембран эпителиальных клеток и более сохранна базальная мембрана.

Выводы. Разработанный нами метод децеллюляризации с использованием физических методов не подразумевает внесения в обрабатываемый биоматериал каких-либо химических веществ, которые впоследствии могут оказать непредсказуемое воздействие на окружающие имплантированную АМ регенерирующие ткани. Также консервация АМ предложенным способом лиофилизации позволяет получить морфологически целостный, эластичный и прочный биоматериал для регенеративной медицины.

Об авторах

К. Е. Кучук

ГБУЗ «СОКОБ имени Т.И. Ерошевского»

Email: kuchukke@rambler.ru
ORCID iD: 0009-0003-2986-5913

врач-офтальмолог, заведующая отделением заготовки и консервации тканей

Россия, Самара

Л. Т. Волова

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России

Email: l.t.volova@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0002-8510-3118

д-р мед. наук, профессор, директор НИИ «БиоТех»

Россия, Самара

И. В. Новиков

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России

Email: р111аа@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-6855-6828

канд. мед. наук, ассистент кафедры травматологии, ортопедии и экстремальной хирургии имени академика РАН А.Ф. Краснова

Россия, Самара

Евгений Сергеевич Милюдин

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: e.s.milyudin@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0001-7610-7523

д-р мед. наук, доцент кафедры оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом медицинских информационных технологий

Россия, Самара

Список литературы

  1. Meller D, Pires RT, Mack RJ, et al. Amniotic membrane transplantation for acute chemical or thermal burns. Ophthalmology. 2000;107(5):980-9; discussion 990. doi: 10.1016/s0161-6420(00)00024-5
  2. Niknejad H, Peirovi H, Jorjani M, et al. Properties of the amniotic membrane for potential use in tissue engineering. Eur Cell Mater. 2008;15:88-99. doi: 10.22203/ecm.v015a07
  3. Pollard SM, Aye NN, Symonds EM. Scanning electron microscope appearances of normal human amnion and umbilical cord at term. Br J Obstet Gynaecol. 1976;83(6):470-7. doi: 10.1111/j.1471-0528.1976.tb00868.x
  4. Adds PJ, Hunt CJ, Dart JK. Amniotic membrane grafts, “fresh” or frozen? A clinical and in vitro comparison. Brit J Ophthalmol. 2001;85(8):905-7. doi: 10.1136/bjo.85.8.905
  5. Aleksandrova OI, Gavrilyuk IO, Mashel TV, et al. On preparation of amniotic membrane as a scaffold for cultivated cells to create corneal bioengineering constructs. Saratov Journal of Medical Scientific Research. 2019;15(2):409-413. [Александрова О.И., Гаврилюк И.О., Машель Т.В., и др. К вопросу о подготовке амниотической мембраны в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций роговицы. Саратовский научно-медицинский журнал. 2019;15(2):409-413]. URL: https://ofmntk.ru/files/upload/2019215.pdf
  6. Li H, Niederkorn JY, Neelam S, et al. Immunosuppressive Factors Secreted by Human Amniotic Epithelial Cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005;46(3):900-907. doi: 10.1167/iovs.04-0495.
  7. Koizumi NJ, Inatomi TJ, Sotozono CJ, et al. Growth factor mRNA and protein in preserved human amniotic membrane. Curr Eye Res. 2000;20(3):173-7. PMID: 10694891
  8. Riau AK, Beuerman RW, Lim LS, Mehta JS. Preservation, sterilization and de-epithelialization of human amniotic membrane for use in ocular surface reconstruction. Biomaterials. 2010;31(2):216-25. doi: 10.1016/j.biomaterials.2009.09.034
  9. Adds PJ, Hunt CJ, Dart JK. Amniotic membrane grafts, “fresh” or frozen? A clinical and in vitro comparison. Br J Ophthalmol. 2001;85(8):905-7. doi: 10.1136/bjo.85.8.905
  10. Milyudin ES. Technology of preservation of the amniotic membrane by drying with silica gel. Technologies of living systems. 2006;3(3):44-49. (In Russ.). [Милюдин Е.С. Технология консервации амниотической мембраны путем высушивания над силикагелем. Технологии живых систем. 2006;3(3):44-49].
  11. Milyudin ES, Kuchuk KE, Bratko OV. Preserved amniotic membrane in a small tissue-engineering complex of the anterior corneal epithelium. Perm Medical Journal. 2016;33(5):47-54. [Милюдин Е.С., Кучук К.Е., Братко О.В. Консервированная амниотическая мембрана в структуре тканеинженерного комплекса переднего эпителиального слоя роговицы. Пермский медицинский журнал. 2016;33(5):47-54]. doi: 10.17816/pmj33547-53
  12. Kim JC, Tseng SCG. Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severly damaged rabbit corneas. Cornea. 1995;14:473-484. PMID: 8536460
  13. Koizumi N, Fullwood NJ, Bairaktaris G, et al. Quantock Cultivation of Corneal Epithelial Cells on Intact and Denuded Human Amniotic Membrane. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 2000;41:2506-2513. PMID: 10937561
  14. Lin CH, Hsia K, Su CK, et al. Sonication-Assisted Method for Decellularization of Human Umbilical Artery for Small-Caliber Vascular Tissue Engineering. Polymers (Basel). 2021;13(11):1699. doi: 10.3390/polym13111699
  15. Melkonyan KI, Rusinova TV, Kozmai YaA, Asyakina AS. Assessment of Nuclear Material Elimination by Different Methods of Dermis Decellularization. Journal Biomed. 2021;17(3E):59-63. [Мелконян К.И., Русинова Т.В., Козмай Я.А., Асякина А.С. Оценка элиминации ядерного материала при различных методах децеллюляризации дермы. Биомедицина. 2021;17(3E):59-63]. doi: 10.33647/2713-0428-17-3E-59-63
  16. Murphy SV, Skardal A, Nelson RAJr, et al. Amnion membrane hydrogel and amnion membrane powder accelerate wound healing in a full thickness porcine skin wound model. Stem Cells Transl Med. 2020;9(1):80-92. doi: 10.1002/sctm.19-0101
  17. Startseva OI, Sinelnikov ME, Babayeva YuV, Trushenkova VV. Decellularization of organs and tissues. Pirogov Russian Journal of Surgery. 2019;(8):59-62. [Старцева О.И., Синельников М.Е., Бабаева Ю.В., Трущенкова В.В. Децеллюляризация органов и тканей. Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2019;(8):59-62]. doi: 10.17116/hirurgia201908159
  18. Tovpeko DV, Kondratenko AA, Astakhov AP, et al. Decellularization of organs and tissues as a key stage in the creation of biocompatible material. Bulletin of the Military Innovation Technopolis “Era”. 2023;4(4):342-346. [Товпеко Д.В., Кондратенко А.А., Астахов А.П., и др. Децеллюляризация органов и тканей как ключевой этап создания биосовместимого материала. Вестник Военного инновационного технополиса «Эра». 2023;4(4):342-346]. doi: 10.56304/S2782375X23040150 EDN: IHEIWC

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рисунок 1. Препарат нативной амниотической мембраны. Окраска пикрофуксином. Ув. х400.

Скачать (1MB)
Метаданные
3. Рисунок 2. Препарат амниотической мембраны, консервированной путем высушивания над силикагелем после предварительной обработки глицерином. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. х400.

Скачать (857KB)
Метаданные
4. Рисунок 3. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Эпителиальная поверхность препарата амниотической мембраны силиковысушенной с предварительным пропитыванием глицерином. Ув. х1000.

Скачать (1MB)
Метаданные
5. Рисунок 4. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Спонгиозный слой препарата амниотической мембраны силиковысушенной с предварительным пропитыванием глицерином. Ув. х400.

Скачать (1MB)
Метаданные
6. Рисунок 5. Препарат амниотической мембраны, консервированной путем лиофилизации после предварительной обработки глицерином. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. х400.

Скачать (817KB)
Метаданные
7. Рисунок 6. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Эпителиальная поверхность препарата лиофилизированной амниотической мембраны с предварительным пропитыванием глицерином. Ув. х50.

Скачать (1MB)
Метаданные
8. Рисунок 7. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Спонгиозный слой препарата лиофилизированной амниотической мембраны с предварительным пропитыванием глицерином. Ув. х400.

Скачать (1MB)
Метаданные
9. Рисунок 8. Препарат амниотической мембраны, консервированной путем лиофильной сушки без обработки глицерином. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. х400.

Скачать (838KB)
Метаданные
10. Рисунок 9. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Эпителиальная поверхность препарата лиофилизированной амниотической мембраны без предварительного пропитывания глицерином. Ув. х400.

Скачать (1MB)
Метаданные
11. Рисунок 10. Электронно-микроскопическое изображение амниотической мембраны в сканирующем электронном микроскопе. Спонгиозный слой препарата лиофилизированной амниотической мембраны без предварительного пропитывания глицерином. Ув. х1000.

Скачать (1MB)
Метаданные

© Кучук К.Е., Волова Л.Т., Новиков И.В., Милюдин Е.С., 2025

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».