Нейротрофический фактор мозга BDNF: новые данные, функции и вопросы

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ

Нейротрофические факторы — это короткие секретируемые полипептиды, играющие регуляторную роль в нервной системе. Их принято подразделять на три подсемейства: нейротрофины, подсемейство глиального фактора и подсемейство цилиарного фактора [1]. Нейротрофины вырабатываются преимущественно клетками центральной (ЦНС) и периферической нервной системы [2]. Они играют ключевую роль в регуляции функций клеток нервной системы, их выживания, пролиферации или дифференцировки в ходе онтогенеза. Нейротрофины также участвуют в регуляции работы нейротрансмиттерных систем и в нейрорегенерации при различного рода патологических процессах (ишемии, травмах и др.). Помимо этого, они вовлечены в ряд физиологических и патофизиологических процессов за пределами ЦНС и оказывают влияние на многие другие клетки в организме. Например, нейротрофин BDNF влияет на кардиомиоциты [3], что объясняет его роль в патофизиологии сердечно-сосудистых заболеваний.

Нейротрофины можно использовать как диагностические и прогностические маркёры ряда физиологических и патофизиологических процессов в нервной системе, а также для терапии состояний, при которых необходима стимуляция нейрорегенерации, что описано в ряде недавних работ как в отечественной [4, 5], так и зарубежной литературе [6–8].

К нейротрофинам относятся фактор роста нервов (англ. nerve growth factor, NGF) — первый идентифицированный и охарактеризованный полипептид данной группы; нейротрофины 3, 4/5 и 6 (англ. neurotrophin 3 (NT-3)), NT-4/5 и NT-6 соответственно [9]), а также нейротрофический фактор мозга (англ. brain derived neurotrophic factor, BDNF). BDNF, впервые описанный в 1982 году [10], представляет особый интерес, поскольку он связан с патогенезом множества социально значимых заболеваний, известен как модулятор нейрорегенерации при травмах нервной системы, а также в качестве индуктора нейрональной или олигодендроцитарной дифференцировки клеток-предшественников. Показано, что BDNF стимулирует и поддерживает функции и активность нейронов, их рост, развитие и выживаемость, а также пластичность (это необходимо для обучения и запоминания). Он также является важным регулятором долговременной потенциации в гиппокампе и других регионах мозга. BDNF задействован в росте, развитии и пластичности глутаматергических и ГАМКергических синапсов, влияет на серотонинергическую и дофаминергическую нейротрансмиссию через модулирование нейрональной дифференциации, служит как паракринным, так и аутокринным фактором на пресинаптических и постсинаптических участках [11, 12]. Наконец, неоспорима роль BDNF в патогенезе злокачественных новообразований в качестве как онкогена, так и онкосупрессора (подробно обсуждается в обзоре [13]) при нейроэпителиальных опухолях и при опухолях другого гистогенеза [14, 15].

Как в фундаментальных исследованиях, так и в трансляционной медицине особый интерес представляет влияние BDNF на клеточную дифференцировку. Стимуляцию олигодендроцитарной дифференцировки интенсивно изучают с целью коррекции потери миелиновых волокон при аутоиммунных демиелинизирующих заболеваниях, а также травмах и гипоксикоишемических повреждениях ЦНС, сопровождающихся демиелинизацией. Терапия при этом может быть направлена как на предотвращение или снижение процесса демиелинизации и гибели олигодендроцитов, так и на стимуляцию ремиелинизации и образования пула функциональных олигодендроцитов, осуществляющих ремиелинизацию [16]. Стимуляция и направленная регуляция нейрональной дифференцировки (например, направление дифференцировки клеток-предшественников в сторону определённой субпопуляции нейронов), в том числе с использованием BDNF, также может быть одной из стратегий, позволяющих восполнить некоторые популяции клеток у пациента. Более того, при патологических состояниях, сопровождаемых массовой гибелью нейронов (например, при спинномозговой травме или черепно-мозговой травме), большие надежды возлагаются на комбинированную терапию, где поражённый участок ткани замещают тканеинженерной конструкцией в сочетании с нейрональными прогениторными клетками (НПК) либо мезенхимальными стволовыми клетками (МСК) и/или дополненной биоактивными молекулами, стимулирующими дифференциацию клеток в направлении нейронов и/или олигодендроцитов, а также стимулирующими секрецию прорегенеративных молекул трансплантированными клетками [17, 18]. К таким биоактивным молекулам относят и BDNF.

Важно отметить: разные варианты полипептида BDNF, образующиеся в ходе процессинга, влияют и на программированную клеточную гибель, что было показано вскоре после открытия и характеризации нейротрофинов. Таким образом, роль BDNF может заключаться не только в стимулировании и дифференцировке определённых клеток, но и в угнетении некоторых субпопуляций клеток, что необходимо в ходе онтогенеза или в ответ на разного рода патологические и физиологические состояния [19].

Со времени опубликования нескольких подробных отечественных обзоров, посвящённых BDNF, его функциям, клеточным рецепторам, влиянию на множество физиологических процессов, роли в развитии ряда заболеваний (в частности, патологий нервной системы и т.д.) [20–22], вышло в печать довольно много новых работ в этой области. Появились новые данные о BDNF, в том числе те, которые раньше не учитывались при дизайне экспериментов и интерпретации результатов. Например, пересматривается и дополняется представление об особенностях экспрессии гена BDNF человека (число транскриптов этого гена, паттерны экспрессии этих транскриптов на разных этапах дифференцировки и в зависимости от стимулов [23, 24]). Появились новые инструменты и ресурсы: например, созданная в 2023 году база данных BDNF DNA Methylation Map (https://lwheinsberg.shinyapps.io/BDNF_DNAmMap/), где собрана информация об известных на настоящий момент паттернах метилирования CpG-островков (протяжённых последовательностей ДНК с динуклеотидами C и G) гена BDNF человека, а также фенотипах, ассоциированных с такими паттернами. Давно известно, что BDNF играет одну из ключевых ролей в клеточной дифференцировке в нервной системе, однако в отечественной литературе отсутствуют обзоры недавних публикаций о роли BDNF в клеточной дифференцировке и дедифференцировке в нервной системе. Завершившаяся в 2023 году пандемия COVID-19 привела к развитию неврологических осложнений у ряда людей, перенёсших данное заболевание. При этом несколько независимых исследований сообщают о влиянии COVID-19 на уровень BDNF и, предположительно, на процессы в нервной системе, в которых он участвует.

Цель данной работы — обобщить современные данные об экспрессии BDNF, его транскрипционных вариантах, рецепторах, молекулярных механизмах и сигнальных путях регуляции функций BDNF с акцентом на нерешённые задачи по изучению биологии BDNF и его трансляционный потенциал.

BDNF И ЕГО мРНК В КЛЕТКАХ, ТКАНЯХ И ОРГАНАХ ЧЕЛОВЕКА

Полипептид BDNF, а также мРНК, транскрибируемая с гена BDNF, кодирующего этот полипептид, обнаружены у человека в спинном мозге и большинстве участков головного мозга, включая обонятельную луковицу, кору, гиппокамп, базальные отделы переднего мозга, средний мозг, гипоталамус, ствол головного мозга [9]. В мозге BDNF вырабатывается глутаматергическими нейронами, микроглией и глиальными клетками, такими как астроциты, изолированные от коры и гиппокампа, но не от полосатого тела. Вне нервной системы BDNF был обнаружен в эндотелиальных клетках [25], кардиомиоцитах [26], гладкомышечных клетках сосудов [25], лейкоцитах [27], тромбоцитах и мегакариоцитах [28] (рис. 1). А мРНК, транскрибируемая с гена BDNF, также обнаруживается в тимусе [29], печени [29], селезёнке [29], сердце [30], лёгких [30] и в других тканях, хотя и в количествах более низких, чем в мозге (рис. 2).

 

Рис. 1. Экспрессия BDNF в клетках человека (данные https://www.proteinatlas.org/, изображение модифицировано авторами).

Fig. 1. Expression of BDNF in human cells (data from https://www.proteinatlas.org/, modified by the authors).

 

Рис. 2. Экспрессия BDNF в тканях и органах человека (данные https://www.proteinatlas.org/, изображение модифицировано авторами). nTPM — нормализованные транскрипты на миллион.

Fig. 2. BDNF expression in human tissues and organs (data from https://www.proteinatlas.org/, modified by the authors). nTPM — normalized transcripts per million.

 

У человека изменение уровня BDNF характерно для таких нейропсихиатрических и нейродегенеративных заболеваний, как депрессия [31], шизофрения [32], биполярное расстройство [33], болезнь Паркинсона [34], рассеянный склероз [35], болезнь Хантингтона [36], тревожное расстройство [37, 38] и др.

С недавнего времени к списку этих патологий можно добавить и COVID-19. Так, крайне интересна недавняя работа, в которой сообщается о снижении уровня BDNF в плазме крови у пациентов с COVID-19 (более выраженном у пациентов мужского пола). Это может объяснять многие нейропсихологические последствия COVID-19 [39]. Пониженная концентрация BDNF у пациентов с COVID-19 по сравнению со здоровыми подтверждается и данными другого исследования (p=0,023) [40], причём статистически значимая разница уровня BDNF была наиболее значимой при сравнении со здоровыми индивидами пациентов с COVID-19 и неврологическими осложнениями (p=0,010). В то же время ещё одна публикация сообщает о повышении уровня BDNF в слюне и крови у пациентов с COVID-19 во время госпитализации и о последующем его снижении, наблюдающемся в течение как минимум шести месяцев после выздоровления [41]. Наконец, у пациентов с тяжёлой формой COVID-19 были обнаружены антитела IgG к BDNF [42]. Причина этого и молекулярный механизм, запускающий продукцию таких антител при COVID-19, до сих пор не установлены. В то же время выявление этих механизмов, предположительно, может помочь предотвратить некоторые связанные с COVID-19 неврологические осложнения. Так как пандемия COVID-19 — это недавнее событие, неудивительно, что такие работы ещё не проведены. Здесь мы указываем на их актуальность и потенциальную медико-социальную значимость.

Далее, терапия экзогенным BDNF либо стимулирование выработки эндогенного BDNF рассматриваются как методы, позволяющие частично восстановить нейрональную пластичность и активность мозга при ишемии головного мозга, болезни Хантингтона, болезни Паркинсона [43–45]. Более того, неоспоримым потенциалом для использования в клинике обладают пептиды-миметики BDNF с агонистической активностью [19]. Концентрация BDNF также меняется при травме головного и спинного мозга, ишемии и т.д, что подробно описано в недавнем обзоре [4]. Результаты транскриптомного анализа указывают, что для МСК человека (по сравнению с рядом дифференцированных клеток, например, фибробластов, остеобластов, хондроцитов, адипоцитов и, предположительно, многих других) характерен повышенный примерно в 20 раз уровень экспрессии BDNF [46]. Секреция BDNF клетками МСК, трансплантированными в зону травмы, является одним из механизмов, лежащих в основе терапевтического нейрорегенеративного эффекта от такой трансплантации [47]. Трёхмерные тканеинженерные матриксы с иммобилизованным BDNF используются в тканевой инженерии и оказывают BDNF-опосредованное влияние на клетки-прогениторы или стволовые клетки в контексте нейрональной дифференцировки либо поведения в тканевом микроокружении нервной системы. Так, например, использование матрикса на основе нанофибрилл с иммобилизованым BDNF стимулировало пролиферацию нейральных стволовых клеток (НСК) и способствовало образованию нейронов и олигодендроцитов [48, 49]. Стимулирование выработки эндогенного BDNF возможно с помощью физических упражнений [50, 51]; однако, учитывая невозможность таких упражнений (к примеру, при многих видах травм), практический интерес представляет поиск биологически активных регуляторных молекул, способных повышать уровень прорегенеративных форм BDNF. Интересен и подход, позволяющий фармакологически модулировать профиль экспрессии различных транскриптов BDNF или их трансляцию, приводящий к предпочтительной транскрипции или трансляции одного из вариантов [52], что может быть функционально значимо, если роль разных транскриптов BDNF в клетке различна.

ГЕН BDNF ЧЕЛОВЕКА

У человека ген BDNF (рис. 3), кодирующий полипептид BDNF, находится на хромосоме 11p13-14, и его длина составляет примерно 70 кб. Он состоит из 11 экзонов: I–V, Vh, VI–VIII, VIIIh и IX. Среди них 9 экзонов (I–V, Vh, VI, VII, IX) содержат функциональные промоторы, приводящие к образованию множества транскриптов [23, 52]. Хотя ранее считалось, что у человека 17 транскриптов гена BDNF, на данный момент можно считать, что их 20: I, IIa, IIb, IIc, III, IV, IV–VIII–IX, V, V–VIII, V–VIII–VIIIh, V–Vh, VIa, VIa–VIII–IX, VIb, VIb–VIII–IX, VIb–IXbd, VIIa, VIIb, IXabcd, IXabd, так как к ранее охарактеризованным 17 транскриптам недавно были добавлены ещё три: IV–VIII–IX, VIa–VIII–IX и VIb–VIII–IX [19].

 

Рис. 3. Структура гена BDNF человека. Стрелки обозначают участки старта альтернативного сплайсинга. UTR — нетранслируемый участок, PolyA — поли(А) сайт, CDS — кодирующая последовательность, ATG — старт-кодон, TAG — стоп-кодон. Иллюстрация модифицирована авторами из [39].

Fig. 3. Structure of the human BDNF gene. Arrows indicate alternative splicing start sites. UTR — untranslated region, PolyA — poly(A) site, CDS — coding sequence, ATG — start codon, TAG — stop codon. Illustration is modified by the authors from [39].

 

Несмотря на такое количество экзонов, последовательность, кодирующая предшественник BDNF, находится лишь в экзоне IX. Остальные экзоны содержат различные участки альтернативного сплайсинга, что не редкость для генов, но такое большое их количество является отличительной характеристикой гена BDNF. Экзон IX может подвергаться внутреннему сплайсингу и подразделяется на четыре участка — a, b, c и d [53]. В результате альтернативного сплайсинга образуется ряд различных транскриптов BDNF, имеющих общую последовательность — кодирующий участок на 3’ конце экзона IX. Транскрипция останавливается в экзоне IX на двух участках полиаденилирования, в результате чего образуются два разных вида мРНК: один содержит короткую 3’ нетранслируемую область (0,35 кб), а другой — длинную (2,85 кб). Транскрипты с короткой нетранслируемой областью (англ. untranslated region, UTR) локализованы в теле нейрона (перикарионе), в то время как транскрипты с длинной UTR транспортируются в дендриты, где они регулируют дендритную морфологию и влияют на долговременную потенциацию [54–56].

В экзонах I–VII расположены промоторы, определяющие тканеспецифическую (региональную) и специфичную для определённых типов клеток экспрессию мРНК BDNF. Так, транскрипты с экзонов II и VII экспрессируются только в мозге, тогда как транскрипты экзонов I, IV и V можно обнаружить в периферической нервной системе; при этом принято считать, что транскрипты с экзонов VI и IX экспрессируются во всех тканях и клетках [57, 58]. Экспрессия разных транскриптов происходит в ответ на различные стимулы. Например, значительное возрастание экспрессии транскрипта с экзонов VIII–IX (по сравнению с экспрессией с экзонов I–IX и IX) происходит при деполяризации клеток, вызванной обработкой KCl, причём оно наиболее значительно в НПК по сравнению с нейронами и астроцитами [23]. Показано также, что транскрипты IV–VIII–IX и VI–VIII–IX преимущественно экспрессируются на ранних этапах развития мозга, в то время как транскрипт V–VIII–IX характерен для взрослого мозга [59]. Транскрипты, содержащие экзоны II, III, IV, V и VII, по большей части специфичны для мозга, в то время как другие мРНК BDNF экспрессируются на разных уровнях в других тканях. За пределами нервной системы выше всего экспрессия транскриптов, содержащих экзоны VI и IXabcd; так, их высокие уровни были обнаружены в тканях сердца, лёгкого, скелетных мышц, яичек, простаты и плаценты [52].

Всё это необходимо учитывать при дизайне исследований и анализе экспрессии мРНК BDNF. Если разные транскрипты BDNF выполняют разные функции, отвечают на разные стимулы, являются биомаркёрами различных физиологических и патологических процессов, то полноценный анализ экспрессии BDNF должен основываться либо на анализе всех транскриптов, либо на анализе транскриптов, релевантных целям и задачам исследования. Противоречия в результатах по экспрессии BDNF, которые получены в разных работах, проведённых на схожих когортах и клеточных субпопуляциях, могут объясняться тем, что разные группы исследователей измеряли уровень разных транскриптов данного гена. Мы указываем на необходимость того, чтобы при сравнении данных по экспрессии BDNF, полученных в разных работах, проводилось сопоставление данных по одним и тем же транскриптам. Характерный паттерн экспрессии определённых транскриптов гена BDNF в ответ на определённые стимулы может оказаться новым маркёром, позволяющим оценить функциональное состояние клеток и их принадлежность к определённой клеточной субпопуляции. Между тем оценка профиля экспрессии всех транскриптов гена BDNF в разных клеточных субпопуляциях нервной системы в норме и при патологии, а также на разных этапах клеточной дифференцировки — всё ещё нерешённая задача.

РЕГУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА BDNF ЧЕЛОВЕКА

Экспрессия гена BDNF регулируется множеством механизмов. Так, на транскрипцию BDNF могут влиять метилирование и гидроксиметилирование ДНК, модификации гистонов, определённые микроРНК и т.д. У млекопитающих метилирование и гидроксиметилирование ДНК осуществляется по остаткам цитозина в составе CpG-динуклеотидов. Обычно CpG группируются в промоторных областях или рядом с ними (CpG-островки). Такая модификация ДНК — один из факторов, регулирующих транскрипцию с определённых промоторов BDNF в различных условиях. Например, показано, что регуляторный белок MeCP2 распознаёт метилированные CpG в промоторе BDNF, связывается с ними и рекрутирует многокомпонентный комплекс, включающий в себя гистондеацетилазу 1 и гистондеацетилазу 2 (англ. histone deacetylase, HDAC) — HDAC1 и HDAC2 соответственно. Это в свою очередь приводит к локальному деацетилированию гистонов, компактизации хроматина и снижению экспрессии гена BDNF [60]. Промотор IV является наиболее изученным в плане влияния метилирования ДНК на экспрессию BDNF. Например, в образцах тканей мозга людей после самоубийства в промоторе IV гена BDNF в области Вернике наблюдался значительно более высокий уровень метилирования ДНК по сравнению с образцами тканей мозга людей, умерших по иным причинам, при этом детектировалось снижение уровня транскрибируемой с него мРНК [61]. В недавнем обзоре A. Treble-Barna и соавт. [62] подробно обсуждается роль метилирования и гидроксиметилирования ДНК в регуляции экспрессии BDNF и приводится ссылка на онлайн-ресурс, в котором собрана информация об известных на настоящий момент CpG гена BDNF человека и паттернах их метилирования, а также фенотипах, ассоциированных с такими паттернами (https://lwheinsberg.shinyapps.io/BDNF_DNAmMap/) [62]. Как мы уже упоминали выше, модификации гистонов влияют на упаковку хроматина и определяют доступность ДНК для регуляторов транскрипции. В свою очередь, фармакологическая модуляция модификаций гистонов может влиять на экспрессию BDNF. К примеру, показано, что ингибитор HDAC вориностат приводит к увеличению уровня мРНК BDNF. Более того, обработка малой молекулой RGFP966, ингибитором HDAC3, приводила и к возрастанию уровня экспрессии BDNF, и к связыванию фактора BRD4 с промоторной областью гена BDNF. Далее, фармакологическое ингибирование BRD4 малой молекулой JQ1 нивелировало стимулирующий эффект вориностата на уровень экспрессии BDNF [63]. Кроме того, уровень экспрессии BDNF может регулироваться микроРНК. микроРНК — это класс малых некодирующих одноцепочечных молекул РНК длиной 18–25 нуклеотидов, способных связываться с 3’-нетранслируемыми областями (3’UTR) мРНК-мишеней и приводить к деградации мРНК-мишени или подавлять трансляцию. В нервной системе уровень и разнообразие микроРНК различны в разных типах клеток. микроРНК являются ключевыми участниками таких процессов, как нейрогенез, созревание нейронов, формирование синапсов, направление аксонов, рост нейритов и поддержание пластичности нейронов. Биосинтез BDNF регулируется микроРНК по принципу отрицательной обратной связи, т.е. повышение уровня BDNF стимулирует экспрессию определённых микроРНК, а повышение уровня этих микроРНК подавляет экспрессию гена BDNF (подробно обсуждается в обзоре J. Keifer и соавт. [64]). Изменения в соотношении уровней BDNF и регулирующих его микроРНК, предположительно, вносят свой вклад в патогенетические механизмы, связанные с нейродегенеративными заболеваниями или нервно-психическими расстройствами. Это значит, что микроРНК, чьими мишенями являются определённые транскрипты BDNF, могут представлять терапевтическую ценность. Например, теоретически возможно использовать определённые микроРНК для избирательного снижения уровня только определённых транскриптов BDNF, что представляет практический интерес. Так, снижение уровня BDNF может являться одной из терапевтических стратегий при глиомах [65]. Как было сказано выше, мРНК BDNF представлена двумя пулами транскриптов, различающихся длиной 3’UTR. Интересно, что несколько предсказанных сайтов связывания регуляторных микроРНК расположены исключительно в длинном 3’UTR BDNF. Согласно анализу in silico, экспрессию BDNF потенциально могут регулировать несколько сотен микроРНК [66]. Для некоторых из них влияние на уровень BDNF подтверждено экспериментально. Например, у человека повышенный уровень miR-206 коррелирует с пониженным уровнем BDNF при раке желудка [67], а на клеточной культуре миобластов мыши было показано, что BDNF является мишенью этой микроРНК [68]. Супрессия miR-10a-5p в МСК, полученных из костного мозга, приводила к усилению BDNF-опосредованного терапевтического эффекта от этих МСК при спинномозговой травме [69]. Однако оценка влияния на BDNF всей панели сотен таких микроРНК [66], индивидуально и в разных сочетаниях, ещё не проведена. Наконец, существует антисмысловая по отношению к гену BDNF длинная некодирующая РНК BDNF-AS (англ. BDNF-antisense), расположенная в хромосомном участке 11p14, чья роль в различных патологических состояниях человека подробно описана в недавнем обзоре [70].

ПРОЦЕССИНГ ПОЛИПЕПТИДА BDNF ЧЕЛОВЕКА

Образование функционального зрелого полипептида BDNF — это многостадийный процесс, при котором образуются несколько полипептидов-предшественников, также обладающих биологической активностью (рис. 4).

 

Рис. 4. Схема процессинга полипептида BDNF. Стрелки указывают на известные сайты расщепления пептидов протеазами. Цифрами обозначены позиции некоторых аминокислот (ак) в полипептидной цепи. СП — сигнальный пептид. Иллюстрация модифицирована авторами из [12].

Fig. 4. BDNF polypeptide processing scheme. Arrows indicate known protease cleavage sites. The numbers indicate the positions of some amino acids (ак) in the polypeptide chain. СП — signal sequence. Illustration is modified by the authors from [12].

 

Сначала в ходе трансляции на гранулярном эндоплазматическом ретикулуме синтезируется preproBDNF — неактивный полипептид, предшественник BDNF. Далее происходит отщепление N-терминального сигнального пептида, что приводит к образованию полипептида proBDNF [57, 71]. Затем proBDNF мигрирует в комплекс Гольджи, где он проходит либо традиционный, либо регулируемый секреторный путь. В транс-сети Гольджи proBDNF подвергается множественным пост-трансляционным модификациям, включая N-гликозилирование. В везикулах proBDNF расщепляется на полипептид BDNF (~13 кДа) и на proBDNF (~17 кДа) при помощи эндопротеаз внутри клетки либо конвертаз в секреторных гранулах. Часть proBDNF также секретируется из клетки без расщепления, и уже вне клетки расщепляется до BDNF такими факторами, как, например, фурин-подобные пропротеинконвертазы [72], плазмин и толлоидоподобные металлопротеиназы [38, 73]. Полипептид BDNF содержит несколько сайтов миристилирования и гликозилирования, а также участки образования дисульфидных связей [74].

Интересно, что для секреции BDNF характерны суточные колебания, обусловленные циркадными ритмами (так, в плазме крови его уровень значительно меняется в течение суток) [75]. Существование таких колебаний необходимо учитывать при дизайне эксперимента с животными моделями или пациентами, а также при публикации результатов важно указывать время суток, когда проводился забор биоматериала. Такая информация, несмотря на её важность, как правило, в публикациях отсутствует. Между тем именно суточными колебаниями уровня BDNF может объясняться противоречивость ряда результатов, полученных разными группами исследователей на схожих когортах (например, на когортах пациентов с COVID-19, где в некоторых исследованиях наблюдали повышение, а в других — понижение уровня BDNF). Целесообразным представляется исследование недостаточно изученных суточных колебаний уровня BDNF в тканях ЦНС, однако имеющиеся данные позволяют предположить, что существует корреляция между концентрацией BDNF в периферической крови и в тканях мозга у ряда лабораторных животных (данные обобщены в недавнем обзоре [76]).

Наконец, очевидна необходимость исследований по поиску малых молекул, способных регулировать транскрипцию BDNF, использование которых, в том числе in vivo, может модулировать уровень BDNF. Уже охарактеризован ряд веществ, которые могут модулировать уровень BDNF: например, биологически активные вещества, содержащиеся в растениях, таких как экстракт Panax ginseng [77]. Далее, недавно была разработана тест-система для высокопроизводительного in vitro скрининга малых молекул на нейронах гиппокампа мыши, а использование данной тест-системы и библиотеки LOPAC (Library of Pharmacologically Active Compounds, библиотека биологически активных веществ) позволило идентифицировать кандидатные молекулы, которые предположительно можно применять для повышения концентрации BDNF в тканях и клетках, где по каким-либо патофизиологическим причинам она понижена по сравнению с нормой [78]. Учитывая возможную разницу в регуляции экспрессии гена, кодирующего BDNF у мыши и человека, необходимо создание такой же тест-системы на основе нейронов человека. Более того, с учётом возможной разницы этой регуляции и отличия паттернов экспрессии всех транскриптов данного гена в нейронах разного типа и локализации более точными будут несколько тест-систем, основанных на использовании нейронов «разного фенотипа» (например, ГАМКергических и т.д.).

РЕЦЕПТОРЫ И СИГНАЛЬНЫЕ ПУТИ BDNF

Известно, что нейротрофины связываются с двумя классами рецепторов: тирозинкиназным рецептором B (TrkB) и рецептором фактора роста нервов (p75). При этом процессированный BDNF преимущественно связывается с рецептором TrkB, с которым у него высокое сродство, что было показано еще в 1991 году вскоре после выделения и характеризации BDNF [79, 80]. Все нейротрофины имеют характерную трёхмерную структуру, содержащую гидрофобное ядро между тремя парами антипараллельных β-тяжей и цистеиновый узел, образованный остатками цистеина [81]. Аминокислотная последовательность зрелого BDNF примерно на 50% совпадает с последовательностями NGF, NT-3 и NT4/5 [9, 82], а это в свою очередь приводит к тому, что с «классическим рецептором BDNF», TrkB, могут связываться и другие нейротрофины, хотя и с меньшей аффинностью. Интересно, что процессированная форма BDNF и белок-предшественник proBDNF приводят к диаметрально противоположным результатам при взаимодействии с рецепторами на клеточной поверхности, что обусловливает многообразие эффектов, опосредованных нейротрофином. Так, взаимодействие незрелой формы proBDNF с рецепторным комплексом, состоящим из рецептора нейротрофина р75 и сортилина, приводит к индукции апоптоза [83–85], в то время как первоочередная функция нейротрофических факторов заключается именно в поддержании выживания, функционирования и дифференцировки клеток нервной системы. Почти сразу после того, как нейротрофины и их рецепторы были охарактеризованы, авторы работ [86–89] установили, что активация р75 может повлечь за собой гибель клеток ЦНС, и эти данные были подтверждены в дальнейших исследованиях. Вышеупомянутый трансмембранный белок р75 является универсальным рецептором, к которому все зрелые нейротрофины обладают примерно одинаковой аффинностью; при этом сродство пронейротрофинов к данному рецептору существенно выше, чем у соответствующих процессированных форм [89]. BDNF взаимодействует на поверхности клеток с киназой TrkB, который представлен тремя изоформами: полноразмерным TrkB full length (TrkB-FL) и двумя укороченными формами: TrkB-Т1 и TrkB-Т2 [90, 91]. Процессированный BDNF и рецепторы к нему присутствуют в нейронах и глиальных клетках, таких как астроциты, микроглия и миелин-образующие олигодендроциты [92], однако профиль экспрессии рецепторов BDNF в нейронах и клетках глии довольно сильно отличается. Так, например, полноразмерная форма рецептора TrkB-FL, преимущественно представленная как в нейронах, так и в глиальных клетках, индуцирует канонические внутриклеточные киназные каскады, в то время как укороченные изоформы TrkB-Т1 и TrkB-Т2, характерные в основном для глиальных клеткок, таких как астроциты, запускают временный и неканонический сигнальный путь [91]. Даже в одном типе клеток — олигодендроцитах — распределение изоформ рецепторов TrkB неравномерно: так, например, полноразмерная изоформа TrkB представлена в олигодендроцитах базальных отделов переднего мозга, но не коры головного мозга [93, 94].

Понимание того, какие рецепторы участвуют в BDNF-опосредованной миелинизации нервных волокон ЦНС, является важным аспектом при детальном изучении механизмов данного процесса. В передаче сигнала от BDNF рецепторы р75 и TrkB задействованы как по отдельности, так и в составе рецепторного комплекса TrkB/p75. При связывании лиганда с комплексом TrkB/p75 происходит активация сигнальных путей, направленных на выживание нейронов и рост отростков. Интересно, что р75 может взаимодействовать с каждой из изоформ TrkB. Укороченные изоформы TrkB-Т1 и TrkB-Т2 выполняют роль конкурентных ингибиторов полноразмерной формы рецептора: отсутствие внутриклеточного тирозинкиназного домена делает невозможной передачу сигнала внутрь клетки при связывании с лигандом. Стоит также отметить, что при димеризации полноразмерной и укороченной изоформ рецептора TrkB происходит формирование нефункциональных гетеродимеров [80, 95, 96]. Интересно, что BDNF сохраняет способность усиливать миелинизацию нейронов при сокультивировании с олигодендроцитами, полученными от мышей, нокаутных по гену рецептора р75, тем самым подтверждая, что экспрессия р75 не является необходимой для BDNF-опосредованной миелинизации. Экспрессия маркёрных белков миелиновой оболочки была неизменной в мозге мышей, нокаутных по гену рецептора р75, по сравнению с мышами дикого типа. Напротив, фосфорилирование тропомиозин-рецепторной киназы TrkB коррелирует с миелинизацией нервных волокон; при этом блокирование TrkB-опосредованного сигнального пути приводит к ингибированию «промиелинизирующего эффекта» BDNF. Данный факт даёт основание полагать, что BDNF усиливает миелинизацию нервных волокон ЦНС через активацию олигодендроцитарных полноразмерных рецепторов TrkB [97, 98].

Достоверно установлено, что BDNF-опосредованная миелинизация нервных волокон происходит через активацию олигодендроцитарных рецепторов TrkB [93, 99, 100]. Однако мыши, нокаутные по гену рецептора TrkB, умирают практически сразу после рождения [101, 102], что затрудняет исследование механизмов, лежащих в основе BDNF-опосредованной миелинизации. Выявлено, что TrkB участвует в регуляции миелинизации ЦНС in vivo, но в зависимости от типа клеток и в зависимости от участка головного мозга. Делеция TrkB в нейральных прогениторных клетках приводила к значительному снижению представленности белков миелина в неокортексе, уменьшению количества миелиновых аксонов и утоньшению миелиновой оболочки в мозолистом теле взрослых мышей [103]. Это подтверждает, что экспрессия TrkB необходима для более выраженной миелинизации в головном мозге [104]. Роль сигнального пути BDNF/TrkB в миелинизации нервных волокон ЦНС обусловлена запускаемыми внутриклеточными сигнальными каскадами, включая Ras/MAPK/ERK-, PI3K/Akt-киназные каскады, а также активацию фосфолипазы Cγ [6, 105]. Действительно, активация обоих ERK и Akt-киназных путей способствует процессу миелинизации, в том числе олигодендроцитарной дифференцировке и образованию миелиновой оболочки аксонов [106–111]. ERK1/2-киназный путь является ключевым в регуляции BDNF-опосредованной миелинизации; эти данные подтверждаются исследованиями in vivo, где блокирование активности киназ ERK1/2 в зрелых олигодендроцитах приводило к массовому снижению миелинизации и дегенерации аксонов [107, 112, 113]. Важно отметить, что, согласно недавнему исследованию, BDNF способен поступать в клетку независимо от связывания с каким-либо рецептором, а также его мишенями могут быть сигнальные белки в цитоплазме [114]. Таким образом, отсутствие описанных выше рецепторов не означает, что BDNF не сможет напрямую влиять на сигнальные пути в такой клетке. Очевидно, что только для секретируемой формы BDNF, но не для BDNF, ковалентно связанного с биоинженерным матриксом, существует возможность участвовать в такой передаче сигнала. Поэтому необходимо более детальное изучение сигнальных путей, регулируемых разными формами BDNF. О существовании рецептор-независимого сигнального пути BDNF сообщает только одна работа [114], поэтому эти данные требуют независимой экспериментальной проверки. В этой работе также показано, что активация данного сигнального пути приводит к транслокации фактора NRF2 в ядро и к инициированию транскрипции его генов-мишеней (к ним относится и ген BDNF). При этом известно, что NRF2 необходим для нейрональной дифференцировки НПК [115].

Экспрессия рецепторов, участвующих в активации вышеописанных сигнальных путей, различается в зависимости от типа ткани и этапа онтогенеза. Так, в 2023 году были опубликованы результаты детального анализа паттернов и динамики изменения экспрессии BDNF и рецепторов TrkB и p75 человека и некоторых других млекопитающих (в том числе крысы и мыши) на разных этапах онтогенеза, в разных тканях и в разных участках мозга [24]. В работе, в частности, были использованы данные транскриптома мозга человека в ходе развития, представленные в атласе BrainSpan (https://www.brainspan.org/). Однако ещё не проведены сбор и детальный анализ таких же данных транскриптома при ряде патологических состояний и их сравнение с транскриптомом здоровых индивидуумов на всех этапах развития заболевания и в разных клеточных субпопуляциях (т.е. с использованием метода секвенирования единичных клеток, англ. single-cell sequencing).

Здесь надо отметить, что не только пониженная концентрация BDNF, но и её повышение могут быть связаны с нежелательными явлениями (неблагоприятным физиологическим ответом). Так, например, при патологическом состоянии, известном как гиперактивный мочевой пузырь (ГМП), детектируется повышенный уровень BDNF в моче, причём в экспериментах на крысах показано, что повышенная концентрация BDNF — это один из факторов, которые могут приводить к ГМП [116]. Помимо этого, повышенная концентрация BDNF может быть связана с эпилепсией [117]. В работах на мышах показано, что повышенная концентрация BDNF приводила к повышению тревожности у животных, они хуже размножались, наблюдались и другие негативные поведенческие изменения [118]. Таким образом, в работах, предлагающих использовать BDNF для терапии, необходимо точное определение верхней границы его концентрации, превышение которой может приводить к нежелательному физиологическому ответу.

BDNF В НЕЙРОНАЛЬНОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКЕ

Хорошо известно, что BDNF является одним из ключевых факторов нейрональной или олигодендроглиальной дифференцировки НСК [119], НПК [120, 121], а также индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) [122] и прямо репрограммированных нейральных прогениторных клеток [123] человека и/или грызунов как in vitro, так и in vivo. Предполагается, что такая регуляция осуществляется в том числе через сигнальные пути ERK1/2 MAPK, Wnt/β-cathenin и mTOR. Так, показано, что BDNF способен значительно повышать эффективность дифференцировки иПСК мышей в НСК путём активации сигнальных путей MAPK/ERK и Wnt/β-cathenin [124], хотя гены-мишени двух данных сигнальных путей, регулируемые BDNF в ходе такого процесса дифференцировки, ещё предстоит определить. Эффекты BDNF на пролиферацию, выживание и дифференцировку НПК мышей опосредованы через взаимодействие BDNF не только с TrkA и TrkB, но и с рецептором p75, экспрессия которого увеличивается при повреждениях мозга [125, 126]. При этом показано, что BDNF способствует дедифференцировке клеток Мюллера сетчатки глаза крыс [127], где увеличение его концентрации приводило к активации сигнального пути Wnt и повышению уровня транскрипционных факторов Sox2 и Pax6 в клетках. При кокультивировании клеток Мюллера с эмбриональными стволовыми клетками (ЭСК), трансфицированными малыми интерферирующими РНК, чьей мишенью является BDNF, происходило снижение уровня Sox2 и Pax6 [127]. Pax6 — ключевой регулятор нейрональной дифференцировки, активирующий пронейрональные и репрессирующий промезодермальные и эндодермальные гены [128]. Поэтому понятно влияние BDNF на нейрональную дифференцировку через сигнальный путь Wnt. В то же время этот сигнальный путь участвует и в дедифференцировке, как было показано на разных клеточных моделях [129, 130]. Таким образом, вероятно, роль Wnt в запуске дифференцировки либо дедифференцировки зависит от типа клеток. Также BDNF спинномозговой жидкости способствует нейрогенезу после внутримозгового кровоизлияния, стимулируя дифференцировку НСК в сторону нейробластов, как было показано на лабораторных животных (крысах) и пациентах с внутримозговым кровоизлиянием [131]. BDNF также увеличивает экспрессию нейрональной синтазы, вырабатывающей монооксид азота во время дифференцировки эмбриональных НПК. Монооксид азота в свою очередь способствует переключению НПК мышей с пролиферации на дифференцировку (in vivo и in vitro) [132]. В нескольких работах продемонстрировано: BDNF в комбинации с другими факторами роста способствует нейрональной дифференцировке МСК человека, полученных из миндалин, что было оценено по приобретению дифференцировавшимися клетками нейроноподобной морфологии (образование нейритов), а также по повышенной экспрессии нейрональных маркёров (β-III-тубулин, MAP2, NeuN, синаптофизин) [133, 134]. В то же время в работе J.H. Song и соавт. применение только BDNF без других факторов не вызывало нейрональной дифференцировки МСК миндалин человека. Можно предположить, что для успешной индукции нейрональной дифференцировки МСК необходимо сочетать BDNF с «коктейлем» других нейротрофических факторов, например NGF и GDNF [135]. Результаты нескольких исследований показывают, что использование BDNF вместе с другими факторами роста действительно может оказывать более выраженное влияние на нейрональную дифференцировку. J.H. Reyes и соавт. показали, что применение BDNF и GDNF in vitro способствует дифференцировке ЭСК мышей в нейроны после транзиентной экспрессии Neurog1 и вызывает заметное увеличение роста нейритов. Данный механизм действия BDNF, вероятно, связан с его влиянием на факторы транскрипции Brn3a, NeuroD1 и GATA3, необходимые для образования нейронов спирального ганглия [136]. В работе F. Liu и соавт. BDNF в сочетании с NGF стимулировал нейрональную дифференцировку в эмбрионах крыс. Экспрессия β-III-тубулина (нейронального маркёра) в клетках была выше всего в случае обработки комбинацией нейротрофинов NGF и BDNF по сравнению с уровнем экспрессии в клетках, обработанных только NGF или только BDNF [137]. Наконец, BDNF стимулировал дифференцировку НПК человека в ГАМКергические нейроны полосатого тела (стриарные нейроны) in vitro [121]. У мышей дифференцировка НСК в направлении нейронов или в астроглиальном направлении определяется ген-специфичным метилированием гистонов в области гена BDNF либо астроглиального GFAP гистонметилтрансферазой KDM4A/C соответственно [138]. Однако отсутствуют данные о том, работает ли такой же механизм в клетках человека.

Важно отметить, что терапевтический эффект МСК при травмах нервной системы и их влияние на дифференцировку и дедифференцировку в значительной мере опосредованы внеклеточными везикулами (ВВ) и их молекулярным карго [139, 140]. При этом известно, что BDNF секретируется в составе таких ВВ. На крысах было показано, что терапевтический нейропротекторный эффект от МСК при внутрижелудочковом кровоизлиянии в мозге основывается во многом на действии BDNF в составе ВВ [141]. Необходимо изучить роль BDNF в тканях человека не только в секретируемой форме, но и в составе ВВ, в том числе при влиянии на клеточную дифференцировку. Более того, в экспериментах in vitro по оценке уровня BDNF, секретируемого клетками в кондиционную среду, также необходимо оценивать как свободно секретируемый BDNF, так и BDNF в составе ВВ. При этом важно учитывать, что иммуноферментный анализ не оценивает уровень BDNF внутри ВВ.

BDNF В ОЛИГОДЕНДРОГЛИАЛЬНОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКЕ

Нейротрофический фактор мозга BDNF секретируется в ответ на нейрональную активность, и повышение его уровня может инициировать каскад глутаматергической нейротрансмиссии, которая активирует N-метил-D-аспартат (NMDA) и рецепторы α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (АМРА) на олигодендроцитарных клетках-предшественниках. Активация глутаматных рецепторов в свою очередь способствует выживанию, пролиферации или дифференцировке клеток-предшественников олигодендроцитов у мышей [142]. Показано, что BDNF, воздействуя на рецептор TrkB, активирует сигнальные пути MAPK/ERK, тем самым способствуя дифференцировке в олигодендроциты у мышей и крыс и миелинизации in vitro и in vivo [109, 143]. В работе J. Langhnoja и соавт. показано, что BDNF способствует дифференцировке в олигодендроцитарном направлении у крыс, а фармакологические ингибиторы рецепторов BDNF TrkA и TrkB подавляют фосфорилирование ERK и олигодендроглиальную дифференцировку [119]. В ЭСК/прогениторах человека BDNF стимулирует пролиферацию и миграцию клеток в ответ на воздействие эпидермального фактора роста (англ. epidermal growth factor, EGF) через сигнальный путь PI3K/Akt [144]. Интересно, что при репозиционировании биоактивных веществ на основе метаанализа транскриптома ингибитор LY294002, чьей мишенью является путь PI3K/Akt, был идентифицирован как молекула, стимулирующая олигодендроглиальную дифференцировку у мышей при определённых низких концентрациях [145]. Показано, что BDNF способствует дифференцировке клеток-предшественников олигодендроцитов и их созреванию в зрелые олигодендроциты у мышей и крыс, о чем свидетельствует увеличение экспрессии олигодендроглиальных маркёров: MAG (миелинассоциированный гликопротеин), PLP (протеолипидный протеин) и MBP (основной белок миелина) [146]. У мышей с нокаутом одной аллели BDNF (разных возрастов от эмбрионального до постнатального периода, а также у взрослых особей), наблюдалось снижение экспрессии MBP, MAG и PLP, что позволяет предположить, что BDNF играет роль в дифференцировке прогениторов в зрелые олигодендроциты с раннего эмбрионального развития [147]. Примечательно, что BDNF влияет на дифференцировку клеток-предшественников олигодендроцитов в олигодендроциты в базальном отделе переднего мозга, но не оказывает данного эффекта на кортикальные клетки [93]. BDNF, секретируемый астроцитами при поражении белого вещества у мышей, также может способствовать дифференцировке предшественников олигодендроцитов [148]. Внутривенное введение BDNF опосредует олигодендроцитарную дифференцировку и образование миелина при субкортикальном ишемическом инсульте у крыс [149]. В клетках мышей (in vitro) BDNF стимулирует дифференцировку НПК в направлении олигодендроцитов [120].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нейротрофический фактор мозга BDNF — один из ключевых регуляторов роста и выживаемости нейронов, синаптогенеза, нейрорегенерации, нейрональной или олигодендроцитарной дифференцировки стволовых клеток и клеток-предшественников. Поэтому неудивительно, что нарушения нормального функционирования BDNF характерны для множества заболеваний нервной системы, а экзогенный BDNF или его миметики используются при терапии. В настоящем обзоре суммирована ключевая информация по биологии BDNF и описана его роль в нейрональной и олигодендроглиальной дифференцировке. Однако в данной области остаются неотвеченными многие вопросы, представляющие интерес с точки зрения как академических, так и прикладных исследований. В частности, неизвестен паттерн экспрессии всех транскриптов гена BDNF на разных стадиях дифференцировки и в разных клеточных субпопуляциях, особенности секреции BDNF в составе внеклеточных везикул. Не изучены роль рецептор-независимой передачи сигнала BDNF (если существование такой передачи будет подтверждено несколькими независимыми исследованиями), циркадные колебания уровня BDNF в нервной системе и роль таких колебаний в физиологических и патофизиологических состояниях. Не изучено также влияние перенесённого COVID-19 на уровень и функции BDNF в разных тканях и при разных сопутствующих патофизиологических состояниях. Если неврологические осложнения после COVID-19 хотя бы отчасти вызваны изменениями концентрации BDNF, интересно оценить использование BDNF-миметиков как возможную терапевтическую стратегию. Далее, для нужд биомедицины, диагностики и прогностики ценным может быть изучение корреляции паттернов метилирования гена BDNF, экспрессии всех его транскриптов, функциональных и фенотипических особенностей разных субпопуляций клеток в нервной системе. Наконец, представляют интерес следующие задачи: оценка влияния миметиков BDNF (в том числе иммобилизованных на трёхмерных матриксах для тканевой инженерии) на нейрональную и олигодендроцитарную дифференцировку плюрипотентных и полипотентных клеток, а также определение молекулярных регуляторов транскрипции гена BDNF и дальнейший поиск малых молекул и микроРНК, способных регулировать транскрипцию BDNF, что позволит модулировать его уровень.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Источник финансирования. Работа была выполнена при финансовой поддержке ФМБА России. Анализ сигнальных путей, участвующих в передаче сигналов нейротрофинов, был выполнен при поддержке гранта Российского научного фонда 21-74-20110.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Вклад авторов. Концепция обзора — М. Живкович, Д.А. Чудакова, В.П. Баклаушев; поисково-аналитическая работа и написание черновика рукописи — М. Живкович, Е.В. Ермолаева, А.В. Соболева, Е.М. Самойлова, Д.А. Чудакова; обсуждение и редактирование рукописи — Д.А. Чудакова, А.В. Соболева, Е.В. Ермолаева, Е.М. Самойлова, В.П. Баклаушев. Авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (авторы внесли равноценный вклад в разработку дизайна и подготовку рукописи статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).

ADDITIONAL INFORMATION

Funding source. The work was performed with the financial support of the Federal Medical and Biological Agency of Russia. Analysis of signaling pathways involved in neurotrophins signaling was performed with the support of the Russian Science Foundation grant 21-74-20110.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Authors’ contribution. Conceptualization — M. Zhivkovich, D.A. Chudakova, V.P. Baklaushev; writing, literature analysis and original draft preparation — M. Zhivkovich, E.V. Ermolaeva, A.V. Soboleva, E.M. Samoilova, D.A. Chudakova; writing review and editing — D.A. Chudakova, A.V. Soboleva, E.V. Ermolaeva, E.M. Samoilova, V.P. Baklaushev. All authors have read and agreed to the published version of the manuscript. All authors made a substantial contribution to the conception of the work, literature search and analysis, drafting and revising the text, and final approval of the manuscript.

Об авторах

Марьяна Живкович

Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова

Автор, ответственный за переписку.
Email: marzhivko@gmail.com
ORCID iD: 0009-0009-5531-123X
Россия, Москва

Елизавета Владимировна Ермолаева

Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова

Email: eliza.ermolaeva@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-9920-4262
SPIN-код: 5299-3480
Россия, Москва

Алеся Владимировна Соболева

Федеральный центр мозга и нейротехнологий ФМБА России; Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: asobolforw@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-9547-0333
SPIN-код: 4402-5237
Россия, Москва; Москва

Екатерина Михайловна Самойлова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН; Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий ФМБА России

Email: samoyket@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-0485-6581
SPIN-код: 3014-6243
Россия, Москва; Москва

Дарья Александровна Чудакова

Федеральный центр мозга и нейротехнологий ФМБА России

Email: daria.chudakova.bio@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-9354-6824
SPIN-код: 1410-9581

канд. биол. наук

Россия, Москва

Владимир Павлович Баклаушев

Федеральный центр мозга и нейротехнологий ФМБА России; Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН; Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий ФМБА России; НИИ пульмонологии ФМБА России

Email: baklaushev@fccps.ru
ORCID iD: 0000-0003-1039-4245
SPIN-код: 3968-2971

д-р мед. наук, доцент

Россия, Москва; Москва; Москва; Москва

Список литературы

Дополнительные файлы