Получение иммунодиагностических препаратов из антигенов Toxocara canis для серодиагностики токсокароза у человека

Токсокароз — гельминтозная инвазия человека, имеющая широкий круг хозяев с эпизоотическим распространением. Серопозитивность населения в странах с умеренным климатом составляет около 37%, в регионах с тропическим — до 92%. Практически все возрастные группы населения подвержены риску инвазии токсокарами. Иммунологический метод в настоящее время сохраняет диагностическое значение для токсокароза, так как реакция иммунной системы на гельминтов сопровождается формированием сенсибилизации, а техники и способы отбора клинического материала для выявления миграционной формы токсокароза у человека являются трудоемкими и инвазивными. Цель настоящего исследования — разработка иммунобиологического препарата на основе экскреторно-секреторных антигенов личинок Toxocara canis для серодиагностики синдрома larva migrans у человека в реакциях иммуноферментного анализа. Антигены получали из личинок Toxocara canis путем культивирования яиц, выделенных из маток самок нематод в питательной среде с глютамином. Очистку препарата от балластных веществ проводили центрифугированием при 8000g в течение 20 минут с последующей фильтрацией через микрофильтрационную мембрану с диаметром пор 0,05–0,15 мкм типа МФАС-П-1 (ЗАО НТЦ «Владипор»). Для выявления антител к токсокарам тестировали сыворотки крови добровольцев — студентов из стран, где частота заболеваемости токсокарозом остается высокой. Для отбора серопозитивных и серонегативных сывороток использовали иммуноферментный анализ с коммерческими антигенами тест-системы «Токсокара-IgG-ИФА-БЕСТ», которую также использовали в качестве контроля. Диагностические антигенные препараты готовили с разной концентрацией белка для исследования серопозитивных сывороток и определения оптимальной дозы антигенного препарата. Результаты. В иммуноферментном анализе с использованием стандартной тест-системы из 250 исследованных проб, токсокара-IgG-антитела выявлены в 20 сыворотках (8%), что свидетельствует об антигенной стимуляции иммунной системы гельминтами и, возможно, о ранее перенесенном заболевании. В ИФА с опытными образцами антигенов количество серопозитивных проб коррелировало с концентрацией белка в антигенных препаратах: при концентрации 1,96 мкг/мл выявлено 5,2% положительных результатов, 1,71 мкг/мл — 3,2%, 0,33 мкг/мл — 0,8% (коэффициент корреляции Пирсона = 0,94). Количество серопозитивных сывороток, выявленных коммерческим антигеном стандартной тест-системы ИФА, совпало с количеством положительных сывороток при использовании опытного образца антигена с концентрацией белка 2,49 мкг/мл. Таким образом, полученные в результате эксперимента иммунодиагностические препараты на основе экскреторно-секреторных антигенов Toxocara canis характеризуются высокой чувствительностью и могут быть использованы для выявления токсокара-IgG-антител в иммуноферментном анализе. Концентрация белка в антигенном препарате не менее 2,49 мкг/мл является оптимальной и по чувствительности совпадает с коммерческим антигеном стандартной тест-системы.