Influence of Dalargin on the hematological indices in mice with experimental ulcerative colitis

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

The low effectiveness of existing methods of treatment for ulcerative colitis provides the necessity of the implementation of new treatment methods. The corrective effect of dalargin has been shown in mice with ulcerative colitis, but the mechanism of drug action requires further investigation. In this regard, the study of the dalargin effect on the dynamics of hematological indices in mice with ulcerative colitis is of undoubted interest. Ulcerative colitis in mice was simulated by replacing drinking water with a 5% solution of sodium dextran sulfate for 5 days. A decrease in the Krebs index, an increase in the leukocyte index, an index of the ratio of neutrophils to monocytes and an index of the ratio of lymphocytes to monocytes under the influence of dalargin (100 mcg/kg subcutaneously for 7 days) were shown in mice with experimental ulcerative colitis on the 5th day, as well as a decrease in the index of the ratio of lymphocytes and monocytes on the 7th day. The corrective effect of dalargin on hematological indices in mice with ulcerative colitis is higher than that of sulfasalazine.

Full Text

Язвенный колит (ЯК) – хроническое, рецидивирующее заболевание толстого кишечника, впервые развивающееся преимущественно у молодых людей в возрасте 20–40 лет, приводящее к тяжелым осложнениям и инвалидизации пациентов [1]. Патогенез язвенного колита включает следующие этапы: нарушение барьерной функции слизистой оболочки толстого кишечника, пенетрация комменсальной и патогенной микрофлоры в глубокие слои кишечной стенки, патологическая активация нейтрофилов, макрофагов, дендритных клеток, лимфоцитов с последующим развитием иммунного воспаления [1]. Низкая эффективность существующих методов терапии ЯК обусловливает необходимость внедрения новых способов его лечения. Ранее показана важная роль генетических факторов в развитии ЯК, что открывает перспективы использования генной терапии [1]. Установлена важная роль оксидативного стресса в повреждении кишечной стенки при патологии толстого кишечника [2]. Учитывая вышесказанное, использование препаратов, обладающих широким спектром фармакологической активности, включая иммуномодулирующее и антиоксидантное действие, представляет несомненный интерес.

Даларгин эффективен при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта, проявляет иммуномодулирующее и антиоксидантное действие [3]. Ранее установлено его корригирующее действие при экспериментальном ЯК у мышей, что проявлялось уменьшением индекса активности болезни, распространенности язв и инфильтратов в стенке толстого кишечника [4]. При этом механизм фармакологического влияния даларгина при ЯК требует дальнейшего изучения.

Известно, что гематологические индексы используются как удобные и информативные маркеры, позволяющие судить о тяжести воспаления, активности врожденного и адаптивного клеточного иммунитета при различных патологических процессах [5, 6].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучение влияние даларгина на динамику гематологических индексов у мышей с экспериментальным язвенным колитом.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 104 мышах-самцах Balb/C весом 21–23 г. Животные были разделены на следующие группы: 1) интактная – 8 мышей; 2) ЯК + физраствор подкожно – 24 мыши; 3) ЯК + физраствор внутрижелудочно – 24 мыши; 4) ЯК + даларгин – 24 мыши; 5) ЯК + сульфасалазин – 24 мыши. Язвенный колит моделировали заменой питьевой воды 5%-м раствором декстрана сульфата натрия (ДСН) (Mr = 40000, «neoFroxx GmbH», ФРГ) в кипяченой воде на 5 суток [7]. Животных выводили из эксперимента на 5, 7 и 28-е сутки. У мышей забирали периферическую кровь в объеме 0,5 мл. Рассчитывали лейкоцитарную формулу в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, и вычисляли следующие индексы: 1) индекс Кребса (отношение нейтрофилов к лимфоцитам); 2) коэффициент Бредекка (отношение лимфоцитов к палочкоядерным нейтрофилам); 3) лейкоцитарный индекс (ЛИ) (отношение лимфоцитов к нейтрофилам); 4) индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ); 5) индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ); 6) индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ) [6].

Даларгин (Тир-D-Ала-Гли-Фен-Лей-Арг) (НПО «Микроген», РФ) применяли подкожно в объеме 0,1 мл в физрастворе в дозе 100 мкг/кг 1 раз в сут. 7 дней с начала моделирования ЯК. Сульфасалазин («КРКА», Словения) вводили мышам внутрижелудочно в виде суспензии в физрастворе в дозе 200 мг/кг в объеме 0,3 мл семикратно с начала моделирования ЯК. Физраствор вводили подкожно (0,1 мл) или внутрижелудочно (0,3 мл) 1 раз в сут. 7 дней. Эксперименты проведены с соблюдением принципов гуманного отношения к лабораторным животным [8], Правил надлежащей лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 199н от 01.04.2016 г.) и одобрены Региональным этическим комитетом КГМУ (протокол заседания секции доклинических исследований РЭК № 1 от 03.04.2023).

Непараметрический U-критерий Манна – Уитни использовали для проверки статистических гипотез при p ≤ 0,05. Материал представлен как медиана (Me), нижний (Ql) и верхний (Q3) квартили. Статобработка выполнена с помощью программного обеспечения Statistica версия 13.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Моделирование ЯК мышам Balb/C сопровождалось увеличением индекса Кребса на 7,3–10,9 % (P = 0,0033–0,0101), снижением ЛИ на 28,3–30,0 % (P = 0,0009) и ИСЛМ на 33,4–35,1 % (P = 0,0023–0,0054) на 5-е сут. эксперимента (табл. 1, 2). На 7-е сут. эксперимента только ЛИ значимо ниже в контрольных группах, чем у интактных мышей: на 21,1–22,4 % (P = 0,0009). На 28-е сут. у мышей с хроническим ЯК все изучаемые индексы значимо отличались от аналогичных значений у интактных крыс. Показано снижение индекса Кребса на 45,5 % (P = 0,0009), ИСНМ на 46,2–49,2 % (P = 0,0009), ИСЛМ на 30,2–30,8 % (P = 0,0039). Остальные индексы, напротив, увеличивались: ЛИ на 40,1–40,9 % (P = 0,0009), индекс Бредекка в 3,87–3,92 раза (P = 0,0009), ИСЛЭ в 2,41–2,43 раза (P = 0,0009). Применение даларгина мышам с экспериментальным ЯК приводило к уменьшению индекса Кребса на 16,9 % (P = 0,0009), увеличению ЛИ на 21,8 % (P = 0,0009), ИСНМ на 34,5 % (P = 0,0054), ИСЛМ на 65,0 % (P = 0,0009) на 5-е сутки эксперимента. На 7-е сутки только ИСЛЭ значимо выше у мышей группы ЯК + даларгин по сравнению с контрольной на 96,7 % (P = 0,0357).

У мышей с хроническим ЯК (28-е сут.) отсутствовали значимые различия между сравниваемыми группами (P > 0,05). Введение сульфасалазина сопровождалось снижением индекса Кребса на 14,8 % (P = 0,0028) и увеличением ИСЛМ на 53,7 % (P = 0,0117) по сравнению со второй контрольной группой. Только один показатель значимо изменялся у мышей с ЯК + сульфасалазин: ЛИ был ниже на 7,5 % (P = 0,0157) на 28-е сут. При сравнении эффектов препаратов установлено, что индекс Кребса выше в группе ЯК + сульфасалазин на 6,1 % (P = 0,0274), ЛИ меньше на 6,3 % (P = 0,0274), ИСЛМ ниже на 4,5 % (P = 0,0357) на 5-е сут. эксперимента. На 7-е сут. ИСЛЭ ниже у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5,0 % (P = 0,0117). На 28-е сут. эксперимента индекс Кребса у мышей группы ЯК + даларгин ниже на 6,7 % (P = 0,0136), ЛИ выше на 8,1 % (P = 0,0087), ИСЛМ больше на 15,7 % (P = 0,0039), а ИСЛЭ на 3,8 % (P = 0,0039).

 

Таблица 1

Влияние даларгина на индекс Кребса, индекс Бредекка, индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])

Группа

Срок
экспери
мента,
сут.

Индекс Кребса
(отношение
нейтрофилов
к лимфоцитам)

Индекс Бредекка
(отношение лимфоцитов
к палочкоядерным
нейтрофилам)

Индекс
соотношения
нейтрофилов
и моноцитов

Интактная (n = 8)

0,55 [0, 54; 0, 56]

14,1 [12, 4; 18, 3]

13,0 [12, 3; 20, 3]

Контрольная
группа № 1
(язвенный колит
+ физраствор)
(n = 24)

5

0,59 [0, 58; 0, 62]

xP = 0,0033

14,9 [12, 3; 17, 4]

P = 0,7527

11,9 [11, 5; 12, 3]

P = 0,1563

7

0,55 [0, 54; 0, 56]

P = 1,0000

14,1 [12, 4; 18, 3]

P = 1,0000

15,5 [14, 0; 22, 5]

P = 0,2271

28

0,30 [0, 29; 0, 32]

xP = 0,0009

55,3 [36, 3; 74, 5]

xP = 0,0009

7,0 [5, 8; 7, 3]

xP = 0,0009

Контрольная
группа № 2
(язвенный колит
+ физраствор)
(n = 24)

5

0,61 [0, 59; 0, 62]

xP = 0,0101

15,7 [14, 1; 20, 9]

xP = 0,0009

14,8 [14, 0; 23, 8]

P = 0,4309

7

0,54 [0, 53; 0, 56]

P = 0,3720

14,9 [12, 4; 15, 2]

P = 0,2076

12,0 [10, 0; 18, 3]

P = 0,1278

28

0,30 [0, 30; 0, 31]

xP = 0,0009

54,5 [36, 8; 72, 5]

xP = 0,0009

6,6 [5, 5; 7, 3]

xP = 0,0009

Группа язвенный
колит +
даларгин в
дозе 100 мкг/кг
(n = 24)

5

0,49 [0, 46; 0, 50]

*P = 0,0009

1P = 0,0274

16,2 [14, 4; 19, 3]

P = 0,1563,

1P = 0,5635

16,0 [15, 3; 31, 5]

*P = 0,0054

1P = 0,8336

7

0,54 [0, 53; 0, 58]

P = 0,9164

1P = 0,8136

15,4 [15, 1; 19, 9]

P = 0,6365,

P = 0,1152

11,0 [8, 0; 17, 0]

P = 0,5286,

P = 0,1152

28

0,30 [0, 29; 0, 31]

P = 0,9164

1P = 0,0136

37,5 [36, 8; 74, 0]

P = 0,7929,

P = 0,0831

7,5 [7, 3; 9, 4]

P = 0,0742,

P = 0,3720

Группа язвенный
колит +
сульфасалазин
200 мг/кг 

(n = 24)

5

0,52 [0, 51; 0, 52]

*P = 0,0028

15,9 [14, 1; 20, 7]

P = 0,0660

16,0 [14, 1; 20, 7]

P = 1,0000

7

0,54 [0, 54; 0, 54]

P = 0,9164

18,3 [15, 7; 21, 0]

P = 0,4008

14,2 [11, 2; 17, 0]

P = 0,7132

28

0,32 [0, 32; 0, 32]

P = 1,0000

36,0 [36, 0; 72, 5]

P = 0,1563

6,9 [5, 7; 7, 7]

P = 0,4008

Примечание: здесь и далее: х p < 0,05 по сравнению с интактной группой; * p < 0,05 по сравнению с контрольной группой; 1 p < 0,05 по сравнению с группой ЯК + сульфасалазин.

 

Таблица 2

Влияние даларгина на индекс лимфоцитов и моноцитов, индекс лимфоцитов и эозинофилов, лейкоцитарный индекс у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])

Показатели

Срок
экспери
мента,
 сут.

Индекс
 соотношения
 лимфоцитов и
 моноцитов

Индекс
соотношения
лимфоцитов и
эозинофилов

Лейкоцитарный
индекс (отношение
лимфоцитов к
нейтрофилам)

1

2

3

4

5

Интактная

30,8 [30, 5; 47, 0]

30,5 [20, 9; 46, 8]

2,37 [2, 30; 2, 53]

Контрольная
группа № 1
(язвенный колит
 + физраствор)

5

20,0 [19, 7; 20, 4]

xP = 0,0023

59,5 [44, 5; 61, 0]

P = 0,2936

1,70 [1, 63; 1, 75]

xP = 0,0009

7

31,0 [30, 5; 47, 5]

P = 0,8336

30,5 [20, 3; 31, 5]

P = 0,8336

1,84 [1, 78; 1, 85]

xP = 0,0009

28

21,5 [18, 2; 24, 9]

xP = 0,0039

73,5 [72, 5; 74, 5]

xP = 0,0009

3,34 [3, 15; 3, 47]

xP = 0,0009

Контрольная
группа № 2
 (язвенный колит
 + физраствор)

5

20,5 [17, 5; 30, 0]

xP = 0,0054

60,0 [59, 5; 61, 0]

P = 0,1563

1,66 [1, 63; 1, 74]

xP = 0,0009

7

31,5 [31, 0; 47, 5]

P = 0,4623

47,3 [31, 0; 63, 0]

P = 0,1563

1,87 [1, 81; 1, 90]

xP = 0,0009

28

21,3 [18, 3; 24, 3]

xP = 0,0039

73,0 [72, 0; 74, 0]

xP = 0,0009

3,32 [3, 23; 3, 36]

xP = 0,0009

Группа
язвенный колит +
даларгин в дозе
 100 мкг/кг

5

33,0 [32, 3; 64, 0]
*P = 0,0009

32,8 [31, 8; 33, 0]
P = 0,2271

2,07 [2, 00; 2, 17]
*P = 0,0009

7

24,9 [17, 8; 29, 8]
*P = 0,0063

60,0 [59, 0; 61, 0]
*P = 0,0357

1,84 [1, 74; 1, 90]
P = 0,8748

28

24,9 [24, 7; 30, 8]
P = 0,1036

74,0 [73, 5; 75, 0]
P = 0,9977

3,34 [3, 22; 3, 41]
P = 1,0000

Группа
язвенный колит +
сульфасалазин
 200 мг/кг

5

31,5 [26, 0; 47, 0]
*P = 0,0117,
1P = 0,0357

31,3 [31, 0; 31, 8]

P = 0,0587,
P = 0,0929

1,94 [1, 93; 1, 97]

P = 0,0016,
1P = 0,0274

7

26,2 [21, 0; 31, 5]
P = 0,1415,
P = 0,1036

63,0 [62, 0; 63, 0]

P = 0,3720,
1P = 0,0117

1,85 [1, 85; 1, 87]

P = 0,8748,
P = 0,7929

28

21,0 [18, 0; 24, 2]
P = 0,3446,
1P = 0,0039

71,5 [36, 0; 72, 5]

P = 0,0520,
1P = 0,0019

3,07 [3, 00; 3, 17]

*P = 0,0157,
1P = 0,0087

 

Полученные в работе результаты подтверждают развитие острого ЯК на 5-е и 7-е сут. и хронического воспаления толстого кишечника на 28-й день. Общепризнано, что ЛИ отражает взаимоотношение гуморального и клеточного звеньев иммунной системы [6]. Снижение этого индекса при остром ЯК указывает на включение клеточных иммунных механизмов в процессе развития воспаления в толстом кишечнике.

Индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов отражает взаимоотношение аффекторного и эффекторного звеньев иммунного ответа [6]. Статистически значимое увеличение ИСЛМ у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5-е сут. эксперимента подтверждает стимулирующее действие препарата на аффекторное звено иммунитета, а снижение этого индекса на 7-е сут. – на активацию эффекторного звена. Ранее показано, что ИСНМ характеризует микрофагальное и макрофагальное звенья системы врожденного иммунитета [6]. По-видимому, изменение гематологических индексов на 5-е и, главным образом, на 7-е сут., обусловлено корригирующим действием даларгина на активность клеток макрофагально-моноцитарного пула. Установлено, что при развитии ЯК увеличивается количество опиоидных μ-рецепторов на макрофагах в стенке ободочной кишки [9]. Даларгин – аналог лей-энкефалина, который связывается с опиоидными δ- и μ-рецепторами [3]. Фармакологическое действие даларгина при ЯК связано, по-видимому, с активацией опиоидных μ-рецепторов на иммунокомпетентных клетках.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные позволяют сделать вывод о связи противовоспалительного действия даларгина при экспериментальном ЯК с его модулирующим влиянием на макрофагальное звено врожденного иммунитета, а также аффекторное и эффекторное звенья клеточного иммунного ответа. При этом корригирующее влияние даларгина на гематологические индексы у мышей с ЯК выше, чем у препарата сравнения сульфасалазина, что подтверждается статистически значимыми различиями их действия на индекс Кребса, ЛИ, ИСЛМ, ИСЛЭ.

 

***

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

×

About the authors

Andrey Yu. Lyashev

Kursk State Medical University

Author for correspondence.
Email: andr.liashev@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-7170-0416

attached to the Department of Pharmacology to prepare his dissertation

Russian Federation, Kursk

Galina S. Mal

Kursk State Medical University

Email: malgs@kursksmu.net
ORCID iD: 0000-0003-2723-781X

Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Department of Pharmacology

Russian Federation, Kursk

Maria A. Zatolokina

Kursk State Medical University; I.S. Turgenev Orel State University

Email: marika1212@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9553-1597

Doctor of Medical Sciences, Professor of the Department of Histology, Embryology, Cytology, Head of the Department of Histology, Cytology and Embryology

Russian Federation, Kursk; Orel

Kirill D. Spiridonov

Kursk State Medical University

Email: kirill.spiridonov.2012@bk.ru
ORCID iD: 0009-0004-0957-3398

6th year student of the Faculty of Medicine

Russian Federation, Kursk

Daniil D. Spiridonov

Kursk State Medical University

Email: d.spiridonov2112@gmail.com
ORCID iD: 0009-0005-9549-1387

6th year student of the Faculty of Medicine

Russian Federation, Kursk

Aleksei V. Tverskoi

Belgorod State National Research University

Email: tverskoy@bsu.edu.ru
ORCID iD: 0000-0003-1537-6564

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Head of the Department of Human Anatomy and Histology, Medical Institute

Russian Federation, Belgorod

References

  1. Polikarpova A.V., Egorova T.V., Bardina M.V. Genetically modified animal models of hereditary diseases for testing of gene-directed therapy. Research Results in Pharmacology. 2022;2(8):11–26.
  2. Korolev V.A., Medvedeva O.A., Riadnova V.A. et al. State of colon parietal microbiota and antioxidant properties of colonocytes in rats with ecological dysbiosis treated with sea vitamin E and buckthorn oil. Nauchnye rezul’taty biomeditsinskikh issledovanii = Research Results in Biomedicine. 2023;1(9):71–85. (In Russ.).
  3. Bulgakov S.A. Peptide therapeutics in pancreatology. Dokazatel’naya gastroenterologiya = Russian Journal of Evidence-based Gastroenterology. 2018;4(7):30–34. (In Russ.).
  4. Supilnikov À.À., Shabalin V.N. Significance of integral hematological indexes for predicting postoperative wound healing in the experiment. Patologicheskaya fiziologiya i eksperimental’naya terapiya = Pathological Physiology and Experimental Therapy. 2018;3(62):49–54. (In Russ.).
  5. Kutepov I.V., Lyashev Yu. D., Zatolokina M.A. The influence of synthetic indolicidin analogues on the hema-tological indices in the rats with experimental periodontitis. Vestnik Volgogradskogo gosudarstvennogo meditsinskogo universiteta = Journal of Volgograd State Medical University. 2021;1(77):44–47.
  6. Khomyakova T.I., Zolotova N.A., Hochanskiy D.N., Khomyakov Yu.N. Modelling of acute and chronic colitis in mice. Lechenie i profilaktika = Therapy and Prophylaxis. 2013;3(7):148–159. (In Russ.).
  7. Anselmi L., Huynh J., Duraffourd C. et al. Activation of μ opioid receptors modulates inflammation in acute experimental colitis. Neurogastroenterology and Motility. 2015;4(27):509–523.
  8. Liashev A.Yu., Mal G.S., Solin A.V. Study of the effectiveness of dalargin in experimental ulcerative colitis. Eksperimental’naya i klinicheskaya farmakologiya = Experimental and clinical pharmacology. 2023;9(86):11. (In Russ.).
  9. Du L., Ha C. Epidemiology and pathogenesis of ulcerative colitis. Gastroenterology Clinics of North America. 2020;4(49):643–654.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2025 Ляшев А.Y., Маль Г.S., Затолокина М.A., Спиридонов К.D., Спиридонов Д.D., Тверской А.V.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».