Isolation of Extracellular Microvesicles from Cell Culture Medium: Comparative Evaluation of Methods


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Extracellular vesicles (EV) are secreted by cells of multicellular organisms. EV mediate specific mode of intercellular communication by “horizontal” exchange of substances and information. This phenomenon seems to have an essential biological significance and became a subject of intensive research. Biogenesis, structural and functional EV features are usually studied in vitro. Several methods of EV isolation from cell culture medium are currently used; however, selection of a particular method may have a significant impact on obtained results. The choice of the optimal method is usually determined by the amount of starting biomaterial and the aims of the research. We have performed a comparative analysis of four different methods of EV isolation from cell culture medium: differential ultracentrifugation, ultracentrifugation with 30% sucrose/D2O “cushion,” precipitation with plant proteins and latex-based immunoaffinity capturing. EV isolated from several human glial cell lines by different approaches were compared in terms of the following parameters: size, concentration, EV morphology, contamination by non-vesicular particles, content of exosomal tetraspanins on the EV surface, content of total proteins, total RNA, and several glioma-associated miRNAs. The applied methods included nanoparticle tracking analysis (NTA), dynamic light scattering (DLS), cryo-electron microscopy, flow cytometry and RT-qPCR. Based on the obtained results, we have developed practical recommendations that may help researchers to make the best choice of the EV isolation method.

Об авторах

T. Shtam

Petersburg Nuclear Physics Institute of National Research Centre Kurchatov Institute; Oncosystem Ltd.; Petrov National Medical Research Center of Oncology; Peter the Great Saint-Petersburg Polytechnic University

Автор, ответственный за переписку.
Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Saint-Petersburg, Gatchina, 188300; Skolkovo, 143026; St. Petersburg, 197758; St. Petersburg, 195251

R. Samsonov

Oncosystem Ltd.; Petrov National Medical Research Center of Oncology

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Skolkovo, 143026; St. Petersburg, 197758

A. Volnitskiy

Petersburg Nuclear Physics Institute of National Research Centre Kurchatov Institute

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Saint-Petersburg, Gatchina, 188300

R. Kamyshinsky

National Research Center Kurchatov Institute

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Moscow, 123182

N. Verlov

Petersburg Nuclear Physics Institute of National Research Centre Kurchatov Institute

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Saint-Petersburg, Gatchina, 188300

M. Kniazeva

Peter the Great Saint-Petersburg Polytechnic University

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, St. Petersburg, 195251

E. Korobkina

Peter the Great Saint-Petersburg Polytechnic University

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, St. Petersburg, 195251

A. Orehov

National Research Center Kurchatov Institute

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Moscow, 123182

A. Vasiliev

National Research Center Kurchatov Institute

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Moscow, 123182

A. Konevega

Petersburg Nuclear Physics Institute of National Research Centre Kurchatov Institute; Peter the Great Saint-Petersburg Polytechnic University

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Saint-Petersburg, Gatchina, 188300; St. Petersburg, 195251

A. Malek

Oncosystem Ltd.; Petrov National Medical Research Center of Oncology

Email: tatyana_shtam@mail.ru
Россия, Skolkovo, 143026; St. Petersburg, 197758

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Pleiades Publishing, Ltd., 2018

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».