Соотношение пролиферации и апоптоза в клетках соединительных тканей кожи при заживлении механической травмы в эксперименте

Обоснование. Важным аспектом течения раневого процесса являются процессы пролиферации и апоптоза в зоне повреждения. Особый интерес представляет характеристика регенерационного гистогенеза тканей кожи в перинекротической области раны, а именно соединительнотканные слои — дерма и гиподермис. Специфика перинекротической области состоит в том, что в ней располагаются камбиальные элементы эпителиальных и соединительных тканей, за счёт которых осуществляется регенерация, а процессы клеточной гибели имеют характерные особенности. Для изучения закономерностей гистогенетических процессов, в том числе пролиферации и клеточной гибели, в тканях с различной камбиальностью чаще всего используют иммуногистохимические методы. Однако по-прежнему сохраняет свою актуальность проблема выбора маркеров, отражающих соотношение процессов пролиферации и апоптоза на разных этапах регенерации.

Цель — провести иммуногистохимическую оценку соотношения пролиферации и апоптотической гибели клеток соединительных тканей кожи на разных этапах заживления механической раны.

Методы. Проведено экспериментальное одноцентровое сплошное контролируемое рандомизированное неослеплённое исследование. Материалом служили образцы кожи бедра крыс линии Wistar на разных этапах заживления после механического повреждения (нанесения глубокой резаной раны). Животных разделили на 9 групп: контрольная группа — интактные крысы (n = 3); остальные группы соответствуют срокам после нанесения механической травмы — 12 ч, 24 ч, 2, 3, 6, 10, 15 и 25 суток (n = 3 в каждой группе). Из фрагментов кожи готовили препараты для гистологического и иммуногистохимического исследования. Для выявления процессов пролиферации использовали антитела к фосфорилированному гистону Н3, для выявления апоптоза — антитела к белку р53 и каспазе 3.

Результаты. В соединительных тканях кожи крыс всех экспериментальных групп обнаружены иммунопозитивные клетки, экспрессирующие фосфогистон Н3, каспазу 3 и белок р53. Определён индекс пролиферации клеток и проанализирована динамика экспрессии проапоптотических белков в интактной коже и в перинекротической области на разных этапах процесса регенерации. На основании полученных данных были рассчитаны пролиферативно-апоптотическое соотношение и числовой показатель (индекс), характеризующий оба процесса. Показано, что пролиферативно-апоптотический индекс достигает наиболее высоких значений в периоды преобладания пролиферации над процессами клеточной гибели — в интактной коже и на завершающих этапах регенерации, минимальные значения индекс принимает при преобладании процессов апоптоза — в фазу воспаления и некроза.

Заключение. В работе впервые использована иммуногистохимическая реакция с антителами к фосфогистону Н3 для исследования процесса регенерации кожной раны. Этот маркер экспрессируется пролиферирующими клетками и в совокупности с маркерами апоптоза позволяет определить пролиферативно-апоптотическое соотношение на разных этапах регенерации.