Конкурентный поляризационный флуоресцентный аптамерный анализ афлатоксина В1: влияние солевого состава реакционной среды на взаимодействие реагентов и предел обнаружения

В работе рассмотрено взаимодействие аптамера (синтетического рецептора на основе одноцепочечной ДНК), имеющего петлевую структуру, со специфическим лигандом – афлатоксином В1 ( АФВ1 ), распространенным токсичным контаминантом пищевых продуктов, Изучено влияние одно- и двухвалентных катионов (Cs ⁺, Li ⁺, Na ⁺, K ⁺, Sr ²⁺, Ba ²⁺, Mg ²⁺, Ca ²⁺) в разных концентрациях на реакционную способность аптамера. Регистрировали анизотропию флуоресценции (АФ) меченного флуоресцеином производного АФВ1, отражающую как связывание с аптамером, так и мобильность комплекса аптамер – меченый АФВ1 в данной реакционной среде. Показано, что регистрируемые изменения АФ существенно отличаются в зависимости от присутствующего в реакционной среде катиона и его концентрации. Влияние на АФ одновалентных катионов наблюдалось в диапазоне 400 мМ–2. 5 М, для двухвалентных более выражено по амплитуде и соответствовало концентрациям от 6 до 200 мМ. По степени изменений АФ катионы образуют ряды Cs ⁺ << K ⁺ ≤ Li ⁺ < Na ⁺ и Ba ²⁺ < Sr ²⁺ < Ca ²⁺ < Mg ²⁺. Сравнение характеристик конкурентного определения АФВ1 для традиционно используемой реакционной среды и среды с 50-кратным (с 20 мМ до 1.0 М) увеличением концентрации ацетата магния показало 12-кратное снижение предела обнаружения – до 2.5 ± 0.4 нМ. Полученные результаты позволяют рассматривать выбор содержания катионов как эффективный инструментарий при создании высокочувствительных аптамерных аналитических систем.

аптамеры, катионы металлов, поляризация флуоресценции, круговой дихроизм