Том 64, № 3 (2019)
- Год: 2019
- Статей: 7
- URL: https://journals.rcsi.science/0507-4088/issue/view/6147
- DOI: https://doi.org/10.36233/0507-4088-2018-64-3
Весь выпуск
ОБЗОРЫ
ТРАНСГЕННЫЕ КОМАРЫ КАК СРЕДСТВО ПРОТИВ РАСПРОСТРАНЕНИЯ АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Аннотация
Комары рода Aedes являются векторами передачи таких арбовирусных заболеваний, как жёлтая лихорадка, лихорадки денге, Чикунгунья, Западного Нила, Зика. Существуют две основные стратегии генетического контроля популяций комаров: SIT (Sterile Insect Technique) - стерилизация, которая использует главным образом методы супрессии для создания самоподдерживающих генетических систем, и RIDL (Release of insects carrying of a Dominant Lethal) - создание популяций насекомых, несущих доминантные летальные гены, основанное на методах генного переноса и создания самоограничивающих генетических систем. Стратегия RIDL более дорогостоящая, но имеет несколько важных преимуществ по сравнению с SIT. Полевые испытания систем генетического контроля проводятся в различных странах начиная с 2009 г. В обзоре рассмотрены генетический контроль, трансгенные технологии для обеспечения стерилизации, генетическая элиминация и трансформация комаров рода Aedes.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):101-104
101-104
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫЯВЛЕНИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА ГЕПАТИТА В СРЕДИ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ В АРХАНГЕЛЬСКЕ
Аннотация
Цель - оценить распространённость и охарактеризовать вирус гепатита В (ВГВ) среди ВИЧ-инфицированных пациентов с вирусологической неэффективностью антиретровирусной терапии (АРВТ) в Архангельске. Материал и методы. В работе были использованы образцы плазмы крови 64 ВИЧ-инфицированных пациентов с вирусологической неэффективностью АРВТ (вирусная нагрузка >50 МЕ/мл после 6 мес АРВТ или повышение вирусной нагрузки после первичного подавления репликации вируса). Для первичного выявления ВГВ экстракцию ДНК из плазмы крови осуществляли с использованием коммерческого набора «АмплиПрайм Рибо-преп» (ФБУН ЦНИИЭ, Москва). Вирус выявляли методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени с помощью коммерческого набора «АмплиСенс® HBV-FL» (ФБУН ЦНИИЭ, Москва). В дальнейшем использовали разработанную во ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» методику, позволяющую выявлять ВГВ в биологическом материале при низкой вирусной нагрузке. Результаты. HBsAg-негативный (оккультный) ГВ был выявлен у 28 (43,8%) ВИЧ-инфицированных пациентов. Обнаружен только ВГВ генотипа D, при этом ВГВ субгенотипа D1 преобладал (39,3%) по сравнению с ВГВ субгенотипов D2 (32,1%) и D3 (28,6%). Серологические маркеры были обнаружены у 42,8% пациентов с выявленной ДНК ВГВ. Выявлены 2 изолята ВГВ с мутациями лекарственной устойчивости в гене полимеразы, приводящими к замещению аминокислот (L180M, M204V), связанному с развитием резистентности к ламивудину, энтекавиру, телбивудину и тенофовиру. Заключение. Высокая распространённость оккультного (HBsAg-негативного) ВГВ среди ВИЧ-инфицированных пациентов свидетельствует о необходимости использования молекулярно-биологических методов диагностики как для идентификации ВГВ, так и для выявления мутаций лекарственной устойчивости ВГВ перед началом антиретровирусной терапии ВИЧ.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):105-111
105-111
ВЫЯВЛЕНИЕ ГЕНОМНОЙ ДНК ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР В ТКАНЯХ РАКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА РОССИЙСКИХ ПАЦИЕНТОВ
Аннотация
Введение. Плоскоклеточная карцинома слизистой оболочки полости рта - одно из наиболее распространённых и агрессивных злокачественных новообразований полости рта. Согласно недавним исследованиям, инфицирование вирусом папилломы человека (ВПЧ) является дополнительным фактором риска развития плоскоклеточного рака полости рта, тогда как роль вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) остается невыясненной. Данные об ассоциации обоих онковирусов с плоскоклеточным раком полости рта довольно противоречивы и существенно варьируют в зависимости от географических регионов и расовой принадлежности. Цель: выяснение распространённости ВПЧ и ВЭБ в образцах рака слизистой оболочки ротовой полости пациентов Московского региона России. Материал и методы. Исследованы фрагменты свежезамороженных тканей злокачественных опухолей ротовой полости от 11 пациентов. Экстрагированную ДНК проверяли на наличие вирусных геномов количественной ПЦР-амплификацией с использованием маркёров, специфичных для ВЭБ и высококанцерогенных типов ВПЧ, с последующим секвенированием. Результаты. ВПЧ не выявлен ни в одном из протестированных образцов, тогда как ВЭБ обнаруживался в 7 (70,0%) из 10 случаев. Наличие ВЭБ-инфекции и вирусную нагрузку в образцах опухолей определяли методом количественной ПЦР-амплификации ВЭБ-специфичных мишеней: BamHI-W, EBNA1 и C-концевой фрагмент гена LMP1. Секвенированием LMP1-положительных ПЦР-продуктов в большинстве образцов (5/6) выявлены варианты с Сао-делецией в гене LMP1, характеризующиеся повышенным трансформирующим потенциалом. Заключение. Высокая частота вируса в проанализированных образцах позволяет предположить ВЭБ-ассоциированную патологию, хотя обнаруженные LMP1-варианты ВЭБ не обязательно связаны с развитием рака полости рта. Для определения потенциальной роли ВЭБ как инфицирующего агента в патогенезе рака слизистой оболочки полости рта необходимы дальнейшие исследования.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):112-117
112-117
АЛЛОКИН-АЛЬФА - НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ ХРОНИЧЕСКОЙ ВИРУС ЭПШТЕЙН-БАРР ИНФЕКЦИИ
Аннотация
Введение. Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) вызывает рецидивирующие инфекционные мононуклеозоподобные симптомы. Сегодня доказано, что яды насекомых и животных богаты антимикробными веществами (пептидами) и содержат широкий спектр активных биологических соединений. Антимикробные пептиды играют важную роль в иммунном ответе врождённого иммунитета хозяина при попадании патогенных микроорганизмов. На основе антимикробных пептидов в России разработан антивирусный препарат аллокин-альфа. Его действующим веществом является цитокиноподобный пептид аллоферон. Цель исследования - оценить влияние терапии аллокином-альфа на количество ДНК ВЭБ в образцах слюны и клинические жалобы у больных хронической инфекцией вируса Эпштейна-Барр (ХВЭБИ). Материал и методы. Обследованы 59 больных ХВЭБИ (45 женщин и 14 мужчин; средний возраст 32,52 ± 1,75 года). У больных определяли количество ДНК ВЭБ в образцах слюны методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме реального времени. Аналитическая чувствительность тест-системы составляет 400 копий/мл. Больные были рандомизированы на 2 группы: 25 пациентов 1-й группы получали терапию аллокином-альфа (9 инъекций подкожно по 1,0 мг через день); 33 пациента 2-й группы получали валтрекс (по 500 мг 2 раза в сутки, внутрь) в течение 2 мес. Результаты. После терапии аллокином-альфа у 59,67% больных были получены отрицательные результаты ПЦР. После 2-месячной терапии валтрексом отрицательные результаты ПЦР были получены только у 27,27% участников исследования. Корреляционный анализ выявил достоверное влияние исходного количества копий ДНК ВЭБ на выраженность клинических жалоб у больных в общей группе ХВЭБИ. Обсуждение. Аллокин-альфа улучшает распознавание вирус-инфицированных клеток и способствует подавлению репликации вируса. Заключение. Терапия аллокином-альфа может быть рекомендована для лечения ХВЭБИ в дозе 1 мг подкожно через день при курсовой дозе не менее 9 инъекций.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):118-124
118-124
ПРОТИВОВИРУСНОЕ ДЕЙСТВИЕ СУБСТАНЦИИ «КАГОЦЕЛ» IN VITRO В ОТНОШЕНИИ ВИРУСОВ ГРИППА H1N1, H1N1PDM09 И H3N2
Аннотация
Введение. Активная циркуляция пандемического гриппа и новых вариантов гриппа H3N2 требует мониторинга противовирусной эффективности лекарственных препаратов, разрешенных для лечения гриппа на территории РФ. Цель: оценка противовирусного действия субстанции «Кагоцел» in vitro в отношении вирусов гриппа H1N1, H1N1pdm09 и H3N2. Материал и методы. Цитотоксическое действие субстанции «Кагоцел» в культуре клеток MDCK определяли с помощью красителя MTS. Противовирусную эффективность субстанции «Кагоцел» в отношении гриппозной инфекции изучали in vitro в культуре клеток MDCK, инфицированных штаммами вирусов гриппа A/Пуэрто-Рико/8/34 (H1N1), А/Калифорния/7/2009 (H1N1)pdm09, А/Гонконг/1/68 (H3N2) и А/Гонконг/4801/2014 (H3N2). Антивирусную активность субстанции «Кагоцел» проверяли по её действию на инфекционный титр вируса гриппа и по влиянию на уровень экспрессии вирусных антигенов в иммуноферментной тест-системе. Результаты. Субстанция «Кагоцел» была малотоксичной для культуры клеток MDCK. Кагоцел одинаково эффективно подавлял инфекционный титр вирусов гриппа А/Гонконг/1/68 (H3N2), А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) и А/Калифорния/7/2009 (H1N1)pdm09 в культуре клеток MDCK. Исследование влияния субстанции «Кагоцел» на уровень экспрессии вирусных антигенов в ИФА тест-системе также показало его противовирусную эффективность в отношении всех тестированных штаммов. Наблюдалась дозозависимость от концентрации субстанции и заражающей дозы вируса. Обсуждение. Эффективное подавление «Кагоцелом» репродукции штаммов вируса гриппа А(H1N1), A(Н1N1)pdm09 и А(H3N2) в разных сублиниях культур клеток MDCK было показано различными методами. Результаты работы позволяют предположить, что наряду со способностью индуцировать интерфероны, Кагоцел может действовать на репродукцию вируса гриппа, но это требует дальнейших исследований. Заключение. Субстанция «Кагоцел» эффективно подавляет репродукцию штаммов вируса гриппа А(H1N1), A(Н1N1)pdm09 и А(H3N2) in vitro. При этом индекс селективности достаточно высок.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):125-131
125-131
РОЛЬ НЕОНАТАЛЬНОГО FC РЕЦЕПТОРА В ДЕПРОТЕИНИЗАЦИИ ВИРУСОВ ECHO И КОКСАКИ А9
Аннотация
Цель настоящей работы - определение функции человеческого неонатального рецептора для Fc фрагмента IgG (hFcRn) в качестве общего депротеинизирующего клеточного рецептора для вирусов ECHO (эховирусов) и Коксаки A9 при заражении культуры клеток рабдомиосаркомы человека (RD). Материал и методы. Исследовали протективный эффект человеческого сывороточного альбумина, очищенного от глобулинов (HSA-GF) и антител к hFcRn, при заражении культур клеток RD штаммами и клонами энтеровирусов вида В с разной рецепторной специфичностью (эховирусы 3, 9, 11, 30-го типов и вирусы Коксаки A9, B4, B5). Результаты. Было показано, что HSA-GF при концентрациях 4% и менее защищал клетки RD от инфицирования эховирусами 3, 9, 11-го типов и вирусом Коксаки A9. Аналогичный спектр протективной активности проявляли антитела к hFcRn в концентрациях ≥2,5 мкг/мл, защищавшие клетки RD от инфицирования эховирусами 3, 9, 11, 30-го типов и вирусом Коксаки A9. Протективный эффект HSA-GF и антител к hFcRn не наблюдался при заражении клеток RD вирусами Коксаки B4 и B5, депротеинизация которых требует участия коксакивирусного-аденовирусного рецептора. Обсуждение. Использование ранее охарактеризованных клонов эховируса 11-го типа с разной рецепторной специфичностью позволило определить функцию hFcRn как каньон-связывающего и депротеинизирующего рецептора в культуре клеток RD. Корреляция величины и динамики наблюдавшихся протективных эффектов с рецепторной специфичностью использованных в работе энтеровирусов указывала на двухэтапность взаимодействия DAF-зависимых эховирусов с рецепторами клеток. Заключение. Определена роль hFcRn как каньон-связывающего и депротеинизирующего рецептора для эховирусов и вируса Коксаки А9 при репродукции в клетках RD. Подтверждена двухэтапная схема взаимодействия с рецепторами DAF-зависимых эховирусов при входе в клетку: сначала со связывающим рецептором (DAF), затем - с депротеинизирующим (hFcRn).
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):132-139
132-139
ИДЕНТИФИКАЦИЯ I- И E- ГЕНОТИПОВ РОТАВИРУСА А С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР
Аннотация
Введение. В связи с разработкой и применением полногеномной системы классификации ротавирусов в последние годы в мире всё чаще отмечают присутствие реассортантных штаммов. Сведения о циркуляции таких штаммов на территории России недостаточны и фрагментарны. Цель настоящей работы - разработка методики определения генотипа сегментов, кодирующих белки VP6 (I-генотип) и NSP4 (E-генотип), позволяющей выявить реассортанты. Материал и методы. Ротавирус-положительные образцы изучали с помощью секвенирования и мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Филогенетический анализ штаммов проводили с применением Байесовского подхода. Результаты. На основе полученных нуклеотидных последовательностей нижегородских ротавирусов выявлены 3 аллеля гена VP6 (I1-1, I2-IV и I2-VII) и 7 аллелей гена NSP4 (E1-I, E1-III, E2-VI, E2-VII, E2-X, E2-XII и Е3). С учётом результатов филогенетического анализа сконструированы олигонуклеотидные праймеры, специфичные в отношении генотипов I1, I2, I3 и Е1, Е2, Е3. Подобраны оптимальные условия для проведения мультиплексной ПЦР. Методика апробирована с использованием проб, содержащих ротавирусы, выявленные в Нижнем Новгороде в 2018 г. Определены спектр и долевое распределение I- и Е-генотипов, а также их комбинации с G- и P-генотипами. Обсуждение. Доминировали ротавирусы с сочетанием G9-P[8]-I1-E1 (32,7%), на 2-м месте были ротавирусы с констелляцией G2-P[4]-I2-E2 (29,1%). В единичных случаях были обнаружены штаммы с генотипами G4-P[8]-I1-E2, G3-P[8]-I2-E2 и G2-P[4]-I2-E1, имеющие гены двух геногрупп ротавирусов, что позволяет отнести их к реассортантам. Заключение. Предложенный подход может послужить удобным инструментом для характеристики ротавирусов на этапе внедрения вакцинации населения против ротавирусной инфекции в России.
Вопросы вирусологии. 2019;64(3):140-144
140-144