Synthesis and cytotoxic activity of 1,5,6,7-tetrahydroindol-4-one derivatives and its thio analogue

Full Text

ВВЕДЕНИЕ

Одним из ценных источников новых биологически активных веществ являются азотсодержащие гетероциклические соединения, в том числе индольного ряда, что обусловлено высоким синтетическим потенциалом самого индольного фрагмента и возможностью синтеза на его основе библиотек разнообразных производных [1–6]. Фармакологический профиль разрешенных для клинического применения лекарственных препаратов, содержащих в своей структуре индольную субъединицу, исключительно широк – это антимикробные, противовирусные, обезболивающие, противовоспалительные, антипсихотические, гипотензивные, противодиабетические, противоопухолевые и др. средства [7]. Причем последний тип активности присущ как сложным по своей структуре индольным алкалоидам, например винбластину, винкристину (Catharanthus roseus) или эводиамину (Evodiae fructus) [8–10], так и самым простым производным индола [11–19]. В последние два десятилетия опубликовано несколько работ, посвященных направленному созданию ингибиторов циклин-зависимых киназ (CDKs) – ферментов, регулирующих жизненный цикл опухолевых клеток, на основе индольной [20–22] или тетрагидроиндолоновой матриц [23–26]. Кроме того, наши собственные исследования [27] in silico показали потенциальную возможность взаимодействия ряда 6,6-диметил-1,2-дизамещенных-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-индол-4-онов с активным сайтом CDK9, что стимулировало продолжение поиска новых цитотоксических агентов среди производных аналогичных структурных групп.

Таким образом, целью настоящей работы является синтез производных тетрагидроиндол-4-она и тетрагидроиндол-4-тиона, in vitro определение их цитотоксических свойств в отношении условно-нормальных клеток HЕК293 (линия эмбриональной почки человека) и опухолевого происхождения – Jurkat (линия лимфобластного лейкоза человека) и MCF-7 (аденокарцинома молочной железы человека) с параллельной in silico оценкой способности выявленных соединений-хитов взаимодействовать с активными сайтами CDK2, CDK5 и CDK9 [28–31].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Синтез исходных тетрагидроиндолонов 2–6 (схема 1) осуществлен согласно литературным методикам [27, 32–34] реакцией димедона 1 с бромацетофеноном и далее с 3-хлор-, 2-метил-, 4-феноксианилинами и бензиламином. Следующую стадию, позволяющую получить тетрагидроиндолтионы 7–11, осуществляли кипячением индолонов 2–6 с эквимольным количеством реагента Лавессона согласно работе [35]; тионы 7–11 получены с выходами 91–96%.

 

Схема 1.

 

Цитотоксическую активность производных 2–11 оценивали в отношении клеток линий HEK293 (нормальные эмбриональные клетки почки человека), Jurkat (клеточная линия лимфобластного лейкоза) и MCF-7 (клетки аденокарциномы молочной железы). Результаты проведенного исследования представлены в табл. 1. Установлено, что соединения 5 и 7 ингибировали метаболическую активность клеток Jurkat со значениями IC₅₀ = 25.4±3.2 и 80.29±18.22 мкM. соответственно. Соединение 3 оказалось активным в отношении двух клеточных линий опухолевого происхождения – Jurkat с IC₅₀ = 14.79±2.11 и MCF-7 с IC₅₀ = 111.57±9.74 мкM., а также в отношении условно-нормальных клеток НЕК293 (IC₅₀ = 93.63±10.87 мкM., схема 2).

 

Таблица 1. Влияние соединений 2–11 на метаболическую активность клеток HEK293, Jurkat и MCF-7.

Соединение	IC50, мкM. a
	HEK293	Jurkat	MCF-7
2	>100	>100	>100
3	93.63±10.87	14.79±2.11	111.57±9.74
4	>100	>100	>100
5	>100	25.4±3.2	>100
6	>100	>100	>100
7	>100	80.29±18.22	>100
8	>100	>100	>100
9	>100	>100	>100
10	>100	>100	>100
11	>100	>100	>100

^а Значения IC₅₀ получены при оценке активности соединений с помощью красителя PrestoBlue® Cell Viability Reagent. Данные представлены в виде среднего значения трех измерений (два независимых эксперимента) для каждой концентрации ± стандартное отклонение, по отношению к значениям контроля (0.1% ДМСО), принятого за 100%.

 

Схема 2.

 

С целью изучения механизма цитотоксического действия наиболее активного соединения 3 проведен анализ его влияния на прогрессию клеточного цикла. Показано, что в клетках линии Jurkat соединение 3 в течение всего эксперимента (через 24, 48, 72 ч) вызывает увеличение количества апоптотических клеток, о чем судили по их накоплению в популяции subG1, сопровождающееся незначительным снижением содержания клеток в фазах G1 и S, что свидетельствует об индукции апоптоза, без влияния на параметры клеточного цикла. В клетках линии аденокарциномы молочной железы MCF-7 инкубация с соединением 3 в течение 24 ч приводит к повышению содержания клеток в S фазе и снижению количества клеток в фазе G2/M (рис. 1а); через 48 ч инкубации наблюдается снижение количества клеток в G1 и накопление клеток в S-фазе (рис. 1б). Данный эффект соединения 3 в отношении клеточной линии MCF-7 сохраняется в течение 72 ч, что сопровождается одновременно накоплением апоптотических клеток (рис. 1в). Таким образом, снижение жизнеспособности клеток линии MCF-7 при действии 3 может быть обусловлено цитостатическим действием вследствие ареста S фазы цикла и подавления клеточной пролиферации. В совокупности полученные результаты свидетельствуют о различном, зависимом от клеточной линии, действии соединения 3: в клетках линии Jurkat соединение индуцирует апоптоз, не оказывая влияния на прогрессию клеточного цикла (цитотоксическое действие), тогда как антипролиферативный эффект соединения в клетках MCF-7 реализуется за счет ареста S-фазы клеточного цикла.

 

Рис. 1. Оценка влияния соединения 3 на прогрессию клеточного цикла клеток HEK293, MCF-7, и Jurkat. Клетки с тестируемым соединением в концентрации IC₅₀, определенной для каждой клеточной линии, инкубировали в течение 24 (а), 48 (б), 72 ч (в). Данные, полученные в двух независимых экспериментах (N = 2, n = 6), представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение; * – р < 0.05 (t-критерий Уилкоксона).

 

В дополнение к оценке цитотоксических свойств синтезированных соединений и с целью определения возможных молекулярных мишеней соединения-хита 3, связанных с его цитотоксическим действием (рис. 1), in silico была осуществлена процедура молекулярного докинга 3 в активные центры циклинзависимых киназ CDK2, CDK5 и CDK9 (PDB коды: 4GCJ, 3O0G, и 3LQ5 [28–31]. В качестве оценочных критериев использовали рассчитанные значения DG_bind (энергия связывания лиганда и белка в лиганд-белковый комплекс), а также количество совпадающих для соединения 3 и референсных лигандов взаимодействий с аминокислотами. Согласно результатам выполненных расчетов (табл. 2) значения ∆G_bind соединения 3 и референсного лиганда S-CR8 (схема 3) оказались наиболее близки в случае CDK9 (–58.84 и –59.64 ккал/моль соответственно).

 

Таблица 2. Результаты докинга соединения-хита 3 в 4GCJ, 3O0G и 3LQ5 сайты связывания циклин-зависимых киназ CDK2, CDK5 и CDK9.

PDB	Лиганд	H-связи	Другие взаимодействия	∆G MM-GBSA
4GCJ	CDK2 (RMSD = 0.215 Å)
	RC-3-89	GLU81, LEU83, ASP86	солевой мостик: ASP145	–69.43
	3	LEU 83	–	–52.47
3O0G	CDK5 (3O0G) (RMSD = 0.335 Å)
	ATP-аналог	LYS33, GLU81, CYS83	солевой мостик: LYS33	–67.57
	3	–	π-катионное: LYS89	–53.35
3LQ5	CDK9 (3LQ5) (RMSD = 0.803 Å)
	S-CR8	GLN27, CYS106	–	–59.64
	3	ASP167, PHE168	–	–58.84

 

Схема 3.

 

Кроме того, соединение 3 и лиганд S-CR8 образуют по две водородные связи с аминокислотной последовательностью активного сайта (лиганд S-CR8 с GLN27 и CYS106, а соединение 3 с ASP167, PHE168, табл. 2). Докинг-позы референсного лиганда S-CR8 и тетрагидроиндолона 3 внутри 3LQ5 сайта связывания CDK9, представлены на рис. 2. Все вышесказанное в совокупности с полученными ранее результатами [27] позволяет предположить, что CDK9 может являться подходящей молекулярной мишенью для направленного синтеза ее ингибиторов на основе тетрагидроиндол-4-оновой системы.

 

Рис. 2. Докинг-позы производного 3 (а) и референсного лиганда S-CR8 (б) в 3LQ5 сайте связывания CDK9; водородные связи обозначены пунктирными линиями.

 

ВЫВОДЫ

Таким образом, синтезирована серия новых производных тетрагидроиндол-4-она и их тиоаналогов. Проведена оценка цитотоксической активности полученных соединений в отношении клеточных линий HEK293, Jurkat и MCF-7, в результате которой обнаружено соединение-хит – 6,6-диметил-1-(2-метилфенил)-2-фенил-1,5,6,7-тетрагидро-4H-индол-4-он 3 – с цитотоксической активностью в отношении клеток линии Jurkat (IC₅₀ = 14.79±2.11 мкM.) и клеток MCF-7 (IC₅₀ = 111.57±9.74 мкM.). In silico показано, что механизм цитотоксического действия соединения 3, предположительно, может реализовываться за счет его взаимодействия с активным сайтом циклин-зависимой киназы CDK9 (PDB код – 3LQ5).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Контроль за ходом реакций осуществляли методом ТСХ на пластинах ALUGRAM^®. Колоночную хроматографию выполняли на силикагеле (0.05–0.1 мм, MACHEREY-NAGEL, Германия). Спектры ЯМР ¹Н, ¹⁵N и ¹³С записывали на импульсном спектрометре Bruker Avance III с рабочей частотой 500.13 (¹H), 50.67 (¹⁵N) и 125.47 МГц (¹³C). Элементный анализ выполняли на CHNS анализаторе Euro 3000 (Hekatech).

Физико-химические константы соединений 2–6, 11 соответствовали литературным [27, 32–34].

Общая методика синтеза тетрагидроиндолтионов 7–10. К суспензии 1 ммоль соответствующего тетрагидроиндола в 5 мл толуола добавляли 0.5 ммоль реагента Лавессона. Полученную смесь кипятили в течение 30 мин. По окончании реакции (контроль по ТСХ) реакционную массу концентрировали, остаток хроматографировали на SiO₂ (элюент – бензол).

1-(2-Гидроксиэтил)-6,6-диметил-2-фенил-1,5,6,7-тетрагидро-4H-индол-4-тион (7) получали из 0.20 г (0.84 ммоль) тетрагидроиндола 2. Выход 0.23 г (91%), аморфное вещество. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃), δ, м. д. (J, Гц): 1.12 с (6H, H⁸⁽⁹⁾), 2.73 с (2H, H⁷), 2.88 с (2H, H⁵), 3.62 т (2H, H^2′, J 5.7), 4.05 т (2H, H^1′, J 5.7), 6.80 с (1H, H³), 7.36 т (1H, H^пара-Ph, J 7.8), 7.39 д. д (2H, H^мета-Ph, J 7.8, 7.4), 7.42 д (2H, H^орто-Ph, J 7.4). Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃), δ_C, м. д.: 28.15 (C⁸⁽⁹⁾), 36.14 (C⁶), 37.28 (C⁷), 46.34 (C^1′), 60.79 (C⁵), 61.61 (C^2′), 108.56 (C³), 128.19 (C^пара-Ph), 128.70 (C^орто-Ph), 129.36 (C^мета-Ph), 131.10 (C^3a), 132.02 (C-Ph), 137.47 (C²), 140.02 (C^7a), 225.40 (C⁴). Спектр ЯМР ¹⁵N (CDCl₃), δ_N, м. д.: 159.67 (N¹). Найдено, %: C 72.18; H 7.08; N 4.65; S 10.69. C₁₈H₂₁NOS. Вычислено, %: C 72.20; H 7.07; N 4.68; S 10.71.

6,6-Диметил-1-(2-метилфенил)-2-фенил-1,5,6,7-тетрагидро-4H-инден-4-тион (8) получали из 0.20 г (0.61 ммоль) тетрагидроиндола 3. Выход 0.19 г (95%), аморфное вещество. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃), δ, м. д. (J, Гц): 1.05 с (3H, H⁸), 1.09 с (3H, H⁹), 1.88 с (3H, CH₃^2′), 2.16 д (1H, H_A⁷, J 16.9), 2.45 д (1H, H_B⁷, J 6.9), 2.90 д (1H, H_A⁵, J 16.8), 2.97 д (1H, H_B⁵, J 16.8), 7.07 с (1H, H³), 7.11 д (2H, H^орто-Ph, J 7.9), 7.14–7.15 м (3H, H^мета-Ph, H^пара-Ph), 7.24 д. д (1H, H^6′, J 7.4, J 1.5), 7.25 д. д (1H, H^3′, J 7.4, J 1.7), 7.31 т. д (1H, H^5′, J 7.4, J 7.4, J 1.7), 7.36 т. д (1H, H^4′, J 7.4, J 7.4, J 1.5). Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃), δ_С, м. д.: 17.44 (CH₃^2′), 27.17 (C⁸), 28.73 (C⁹), 36.19 (C⁶), 37.22 (C⁷), 61.04 (C⁵), 107.43 (C³), 127.04 (C^5′), 127.19 (C^пара-Ph), 127.46 (C^орто-Ph), 128.21 (C^мета-Ph), 128.47 (C^6′), 129.38 (C^4′), 131.31 (C^3′), 131.36 (C^3a), 131.63 (C-Ph), 135.97 (C^2′), 136.61 (C^1′), 137.89 (C²), 140.18 (C^7a), 226.00 (C⁴). Спектр ЯМР ¹⁵N (CDCl₃), δ_N, м. д.: 171.39 (N¹). Найдено, %: C 79.97; H 6.70; N 4.06; S 9.29. C₂₃H₂₃NS. Вычислено, %: C 79.96; H 6.71; N 4.05; S 9.28.

6,6-Диметил-1-(4-феноксифенил)-2-фенил-1,5,6,7-тетрагидро-4H-инден-4-тион (9) получали из 0.20 г (0.49 ммоль) тетрагидроиндола 4. Выход 0.20 г (96%), аморфное вещество. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃), δ, м. д. (J, Гц): 1.08 с (6H, H⁸⁽⁹⁾), 2.50 с (2H, H⁷), 2.93 с (2H, H⁵), 6.99 д (2H, H^2′(6′), J 8.8), 7.01 с (1H, H³), 7.05 д (2H, H^2ʺ(6ʺ), J 7.7), 7.07 д (2H, H^3′(5′), J 8.8), 7.11 д (2H, H^орто-Ph, J 7.9), 7.17–7.19 м (4H, H^4ʺ, H^пара-Ph, H^мета-Ph), 7.38 т (2H, H^3ʺ(5ʺ), J 7.7, J 7.7). Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃), δ_С, м. д.: 28.03 (C⁸⁽⁹⁾), 36.16 (C⁶), 37.64 (C⁷), 61.00 (C⁵), 107.94 (C³), 118.70 (C^2′(6′)), 119.63 (C^2ʺ(6ʺ)), 124.27 (C^4ʺ), 127.19 (C^пара-Ph), 128.18 (C^мета-Ph), 128.24 (C^орто-Ph), 128.90 (C^3′(5′)), 130.00 (C^3ʺ(5ʺ)), 131.34 (C^3a), 131.52 (C-Ph), 131.95 (C^1′), 137.83 (C²), 140.04 (C^7a), 156.04 (C^1ʺ), 157.59 (C^4′), 226.13 (C4). Спектр ЯМР ¹⁵N (CDCl₃), δ_N, м. д.: 171.97 (N¹). Найдено, %: C 79.39; H 5.96; N 3.33; S 7.54. C₂₈H₂₅NOS. Вычислено, %: C 79.40; H 5.95; N 3.31; S 7.57.

1-Бензил-6,6-диметил-2-фенил-1,5,6,7-тетрагидро-4H-инден-4-тион (10) получали из 0.20 г (0.61 ммоль) тетрагидроиндола 5. Выход 0.19 г (92%), аморфное вещество. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃), δ, м. д. (J, Гц): 1.04 с (6H, H^-8(9)), 2.47 с (2H, H⁷), 2.90 с (2H, H⁵), 5.10 с (2H, H^1′), 6.91 с (1H, H³), 6.93 д (2H, H^2ʺ(6ʺ), J 7.4), 7.25–7.33 м (8H, H^3ʺ(5ʺ), H^орто-Ph, H^пара-Ph, H^мета-Ph H^4ʺ). Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃), δ_С, м. д.: 27.99 (C⁸⁽⁹⁾), 36.18 (C⁶), 36.82 (C⁷), 47.96 (C^1′), 60.88 (C⁵), 107.91 (C³), 125.61 (C^2ʺ(6ʺ)), 127.67 (C^4ʺ), 128.07 (C^пара-Ph), 128.58 (C^мета-Ph), 128.99 (C^3ʺ(5ʺ)), 129.00 (C^орто_-Ph), 131.36 (C^3a), 131.66 (C-Ph), 136.85 (C^1ʺ), 138.28 (C²), 139.34 (C^7a), 225.73 (C⁴). Спектр ЯМР ¹⁵N (CDCl₃), δ_N, м. д.: 160.62 (N¹). Найдено, %: C 79.95; H 6.73; N 4.04; S 9.30. C₂₃H₂₃NS. Вычислено, %: C 79.96; H 6.71; N 4.05; S 9.28.

Цитотоксические свойства соединений в отношении условно-нормальных (НEK293) и клеток опухолевого происхождения (Jurkat, MCF-7) оценивали с использованием красителя PrestoBlue® Cell Viability Reagent (Thermo Fisher Scientific, США) согласно протоколу изготовителя. Для этого клетки линии НEK293 и MCF-7 культивировали в среде DMEM (Биолот, Россия), клетки линии Jurkat – в среде RPMI (Биолот, Россия) в присутствии 10%-ной эмбриональной бычьей сыворотки, 2 мМ. L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина сульфата. После 24 ч культивирования в каждую лунку вносили исследуемые соединения в конечных концентрациях 1, 10, 100 мкМ. (в 0.1%-ном растворе ДМСО) и инкубировали в течение 48 ч, после чего добавляли PrestoBlue® Cell Viability Reagent в количестве, рекомендованном производителем (1:9). Флуоресценцию красителя (степень редукции красителя) измеряли при длине волны 590 нм, используя мультипланшетный анализатор 2300 EnSpire® Multimode Plate Reader (PerkinElmer, США). Метаболическую активность клеток рассчитывали по отношению к контролю (0.1% ДМСО), который принимали за 100%. Значение концентрации соединения, вызывающее 50%-ное подавление жизнеспособности клеток (IC₅₀), определяли на основе дозозависимых кривых с помощью программного обеспечения GraphPadPrism v.5.02 (GraphPad Software Inc., США). Данные, полученные в 2 независимых экспериментах, выражали в виде среднего значения трех измерений для каждой концентрации ± стандартное отклонение, по отношению к значениям контроля (0.1% ДМСО), принятого за 100%.

Анализ клеточного цикла. Клетки рассаживали в 6-луночные планшеты в питательной среде DMEM или RPMI, содержащей 10%-ную эмбриональную бычью сыворотку, 2 мМ. L-глутамин. Через 24 ч клетки промывали PBS (2 раза) и меняли среду на DМЕМ/RPMI, содержащую 2 мМ. L- глутамин и инкубировали в течение 24, 48, 72 ч. По истечении времени инкубации клетки трипсинизировали, отмывали PBS и фиксировали 70%-ным этанолом в течение >24 ч при –20°С. Анализ клеточного цикла осуществляли методом проточной цитофлуориметрии после окрашивания клеток пропидийиодидом (PI). Для этого зафиксированные клетки отмывали от этанола 2 раза PBS (3 мин, при 1000g), инкубировали с РНКазой А (100 мкг/мл) 5 мин при комнатной температуре и затем с PI (25 мкг/мл) дополнительные 15 мин (при комнатной температуре, в темноте). Анализ распределения клеток по фазам клеточного цикла проводили на проточном цитофлуориметре Novocyte® 2060 (ACEA Bioscience Inc., США). Численную обработку гистограмм флуоресценции и определение процента клеток, соответствующих по количеству ДНК фазам клеточного цикла, проводили с помощью модуля для оценки клеточного цикла программы NovoExpress 1.2.5 (ACEA Bioscience Inc., США). Эксперименты проводили в 2 биологических повторностях. Статистическую обработку полученных результатов осуществляли в рамках стандартного пакета методов статистического анализа Statistiсa 6.0 для Windows (StatSoft, США), GraphPad Prism 5.0. (GraphPad Software, США).

Молекулярный докинг синтезированных соединений в активные сайты циклин-зависимых киназ CDK-2, CDK-5 и CDK-9 был проведен с помощью модулей программного комплекса Schrödinger Suites 2018-1 [36]. Соответствующие перечисленным циклин-зависимым киназам PDB-коды 4GCJ, 3O0G и 3LQ5, были загружены из базы данных RCSB PDB [28], в качестве референсных лигандов использованы соединения RC-3-89, ATP-аналог и S-CR8 [29–31]. Для подготовки соединения 3 и референсных лигандов был применен модуль LigPrep, геометрическая оптимизация силовым полем OPLS3e [37] для подготовки протеинов 4GCJ, 3O0G и 3LQ5 – модули Protein Preparation Wizard [38] и Prime [39, 40]. Процедуру докинга проводили сначала в режиме Glide (протокол Extra Precision) в соответствующие 4GCJ, 3O0Gи 3LQ5 сайты, вкупе с соответствующими референсными лигандами [41–43], затем в режиме Induced Fit Docking. После чего «улучшенные» позы лигандов были подвергнуты оценке MM-GBSA (в модуле Primе) для расчета значений DG_bind; на этом этапе оценки применяли модель сольватации VSGB (OPLS3e), все аминокислотные остатки в радиусе 3 Å от лигандов рассматривали как «гибкие». Отметим, что рассчитанные в процессе выполнения ре-докинга референсных лигандов RC-3-89, ATP-аналога и S-CR8 значения RMSD оказались приемлемыми и составили 0.215, 0.335 и 0.803 Å соответственно (табл. 1), что свидетельствует о корректности воспроизведения их поз внутри активных сайтов и соответствии кристаллографическим данным [29–31] в процессе моделирования.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Все эксперименты выполнены на оборудовании Центра коллективного пользования «Химия» Уфимского института химии Уфимского исследовательского центра РАН и Регионального центра коллективного пользования «Агидель» Уфимского исследовательского центра РАН.

ФИНАНСОВАЯ ПОДДЕРЖКА

Работа выполнена в рамках государственного задания Уфимского института химии Уфимского федерального исследовательского центра Российской академии наук (№ 122031400260-7) и государственного задания Института биохимии и генетики Уфимского федерального исследовательского центра Российской академии наук (№ 122041400169-2).

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

About the authors

V. A. Sorokina

Ufa Federal Research Center of the Russian Academy of Sciences

Author for correspondence.
Email: tsypysheva.ip@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-5311-9580

Ufa Institute of Chemistry

Russian Federation, Ufa

D. O. Tsypyshev

Ufa Federal Research Center of the Russian Academy of Sciences

Email: tsypysheva.ip@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-4551-0226

Ufa Institute of Chemistry

Russian Federation, Ufa

A. V. Koval’skaya

Ufa Federal Research Center of the Russian Academy of Sciences

Email: tsypysheva.ip@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-7772-2894

Ufa Institute of Chemistry

Russian Federation, Ufa

V. A. Vakhitov

Ufa Federal Research Center of the Russian Academy of Sciences

Email: tsypysheva.ip@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-8805-9872

Institute of Biochemistry and Genetics

Russian Federation, Ufa

I. P. Tsypysheva

Ufa Federal Research Center of the Russian Academy of Sciences

Email: tsypysheva.ip@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-5025-8742

Institute of Biochemistry and Genetics

Russian Federation, Ufa

References

Supplementary files