Synthesis in Escherichia coli and Characterization of Human Recombinant Erythropoietin with Additional Heparin-Binding Domain


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Recombinant human erythropoietin (EPO) with additional N-terminal heparin-binding protein domain (HBD) from bone morphogenetic protein 2 was synthesized in Escherichia coli cells. A procedure for HBD-EPO purification and refolding was developed for obtaining highly-purified HBD-EPO. The structure of recombinant HBD-EPO was close to that of the native EPO protein. HBD-EPO contained two disulfide bonds, as shown by MALDI-TOF mass spectrometry. The protein demonstrated in vitro biological activity in the proliferation of human erythroleukemia TF-1 cell test and in vivo activity in animal models. HBD-EPO increased the number of reticulocytes in the blood after subcutaneous injection and displayed local angiogenic activity after subcutaneous implantation of demineralized bone matrix (DBM) discs with immobilized HBD-EPO. We developed a quantitative sandwich ELISA method for measuring HBD-EPO concentration in solution using rabbit polyclonal serum and commercial monoclonal anti-EPO antibodies. Pharmacokinetic properties of HBD-EPO were typical for bacterially produced EPO. Under physiological conditions, HBD-EPO can reversibly bind to DBM, which is often used as an osteoplastic material for treatment of bone pathologies. The data on HBD-EPO binding to DBM and local angiogenic activity of this protein give hope for successful application of HBD-EPO immobilized on DBM in experiments on bone regeneration.

Об авторах

A. Karyagina

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology; All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology; Belozersky Institute of Physical and Chemical Biology

Автор, ответственный за переписку.
Email: akaryagina@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 127550; Moscow, 119991

T. Grunina

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

M. Poponova

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

P. Orlova

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

V. Manskikh

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology; Belozersky Institute of Physical and Chemical Biology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 119991

A. Demidenko

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

N. Strukova

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

M. Manukhina

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

K. Nikitin

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

A. Lyaschuk

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

Z. Galushkina

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

S. Cherepushkin

State Research Institute of Genetics and Selection of Industrial Microorganisms

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 117545

N. Polyakov

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology; Vernadsky Institute of Geochemistry and Analytical Chemistry

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 119334

A. Solovyev

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

V. Zhukhovitsky

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

D. Tretyak

Moscow Technological University (Lomonosov Institute of Fine Chemical Technologies)

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 119571

I. Boksha

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology; Research Center of Mental Health

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 115522

A. Gromov

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology

Автор, ответственный за переписку.
Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098

V. Lunin

Gamaleya National Research Center of Epidemiology and Microbiology; All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology

Email: alexander.v.gromov@gmail.com
Россия, Moscow, 123098; Moscow, 127550

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Pleiades Publishing, Ltd., 2018

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».