Investigation of the mesenchymal stem cell compartment by means of a lentiviral barcode library


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

The hematopoietic bone marrow microenvironment is formed by proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs). The MSC compartment has been less studied than the hematopoietic stem cell compartment. To characterize the structure of the MSC compartment, it is necessary to trace the fate of distinct mesenchymal cells. To do so, mesenchymal progenitors need to be marked at the single-cell level. A method for individual marking of normal and cancer stem cells based on genetic “barcodes” has been developed for the last 10 years. Such approach has not yet been applied to MSCs. The aim of this study was to evaluate the possibility of using such barcoding strategy to mark MSCs and their descendants, colony-forming units of fibroblasts (CFU-Fs). Adherent cell layers (ACLs) of murine long-term bone marrow cultures (LTBMCs) were transduced with a lentiviral library with barcodes consisting of 32 + 3 degenerate nucleotides. Infected ACLs were suspended, and CFU-F-derived clones were obtained. DNA was isolated from each individual colony, and barcodes were analyzed in marked CFU-F-derived colonies by means of conventional polymerase chain reaction and Sanger sequencing. Barcodes were identified in 154 marked colonies. All barcodes appeared to be unique: there were no two distinct colonies bearing the same barcode. It was shown that ACLs included CFU-Fs with different proliferative potential. MSCs are located higher in the hierarchy of mesenchymal progenitors than CFU-Fs, so the presented data indicate that MSCs proliferate rarely in LTBMCs. A method of stable individual marking and comparing the markers in mesenchymal progenitor cells has been developed in this work. We show for the first time that a barcoded library of lentiviruses is an effective tool for studying stromal progenitor cells.

Об авторах

A. Bigildeev

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Автор, ответственный за переписку.
Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

K. Cornils

Research Department of Cell and Gene Therapy, Department of Stem Cell Transplantation

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Германия, Hamburg

T. Aranyossy

Research Department of Cell and Gene Therapy, Department of Stem Cell Transplantation

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Германия, Hamburg

N. Sats

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

N. Petinati

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

I. Shipounova

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

V. Surin

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

O. Pshenichnikova

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

K. Riecken

Research Department of Cell and Gene Therapy, Department of Stem Cell Transplantation

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Германия, Hamburg

B. Fehse

Research Department of Cell and Gene Therapy, Department of Stem Cell Transplantation

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Германия, Hamburg

N. Drize

Laboratory of Physiology of Hematopoiesis, National Research Center for Hematology

Email: bigildeev.ae@gmail.com
Россия, Moscow, 125167

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Pleiades Publishing, Ltd., 2016

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».