Получение и оценка свойств рекомбинантного аналога мажорного аллергена пыльцы березы Bet v 1


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель работы. Для внедрения покомпонентной аллергодиагностики в лабораторную практику необходимо создать протоколы получения, очистки и верификации свойств синтетических аллергенов. Мажорный белок пыльцы березы Bet v 1, являющийся представителем суперсемейства PR-10, представляет значительный интерес благодаря высокой частоте случаев сенсибилизации и проявлению кросс-реактивных свойств. Материалы и методы. Для получения синтетического белка были применены методы клонирования ДНК с последующей экспрессией в культуре клеток E. coli. Очистка выполнена методом металл-аффинной хроматографии. Оценка иммунохимических свойств проведена в аллергосорбентном тесте, ИФА-анализе и лайн-блоте. Результаты. В ходе работы нами получен высокопродуктивный бактериальный штамм E. coli, содержащий экспрессионную конструкцию мажорного аллергена пыльцы березы — белок Bet v 1. Произведена оценка его физико-химических и иммунологических свойств в различных тест-системах с использованием референсных препаратов и панели сывороток. Заключение. Показано, что полученный синтетический аналог белка Bet v 1 может быть использован для тестирования наличия аллерген-специфических иммуноглобулинов класса Е в образцах сыворотки крови. Данный аллергенный компонент может быть применен для покомпонентной оценки профиля сенсибилизации пациента.

Об авторах

А Е Павлов

ООО «Вега» Группа компаний «Алкор био»; Санкт-Петербургский Государственный университет

Email: apavlov@alkorbio.ru
г. Санкт-Петербург

Н А Сейлиева

ООО «Вега» Группа компаний «Алкор био»

г. Санкт-Петербург

О Ю Мухортых

ООО «Вега» Группа компаний «Алкор био»

г. Санкт-Петербург

В Е Стефанов

Санкт-Петербургский Государственный университет

г. Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Madsen C. Prevalence of food allergy: an overview. Proc. Nutr. Soc. 2005, v. 64, p. 413-417.
  2. Ebo D.G., Hagendorens M.M., Bridts C.H., Stevens W.J. In vitro diagnosis of IgE-mediated allergy: breakthroughs in the last decade. Expert. Rev. Clin. Immunol. 2012, v. 8, p. 9-11.
  3. Eriksson N.E., Ahlstedt S. Diagnosis of reaginic allergy with house dust, animal dander and pollen allergens in adult patients. V. A comparison between the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), provocation tests, skin tests and RAST Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1977, v 54, p. 88-95.
  4. Dolen W.K. Allergen extract standartization: reality, myth, or dream? Ann. Allergy Asthma Immunol. 1995, v. 75, p. 81-82.
  5. Ipsen H., Løwenstein H. Isolation and immunochemical characterization of the major allergen of birch pollen (Betula verrucosa). J. Allergy Clin. Immunol. 1983, v. 72, p. 150-159.
  6. Павлов А.Е., Сейлиева Н.А., Стефанов В.Е. Перспективы развития молекулярной диагностики аллергии в формате микрочипа. Клин. лаб. диагн. 2011, № 12, с. 3-7.
  7. Asturias J.A., Ibarrola I., Amat P. et al. Purified allergens vs. complete extract in the diagnosis of plane tree pollen allergy. Clin. Exp. Allergy. 2006, v. 36, p. 1505-1512.
  8. Midoro-Horiuti T., Brooks E.G., Goldblum R.M. Pathogenesis-related proteins of plants as allergens. Ann. Allergy Asthma Immunol. 2001, v. 87, p. 261-271.
  9. WHO/IUIS Allergen Nomenclature Sub-committee: [www. allergen.org]. URL: http://www.allergen.org/.
  10. Swoboda I., Jilek A., Ferreira F. et al. Isoforms of Bet v 1, the major birch pollen allergen, analyzed by liquid chromatography, mass spectrometry and cDNA cloning. J. Biol. Chem. 1995, v. 270, p. 2607-2613.
  11. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970, Aug 15, v. 227 (5259), р. 680-685.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Фармарус Принт Медиа, 2012

Согласие на обработку персональных данных

 

Используя сайт https://journals.rcsi.science, я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных») даю согласие на обработку персональных данных на этом сайте (текст Согласия) и на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика» (текст Согласия).