Получение и характеристика рекомбинантного белка, содержащегоантигенные эпитопы аллергена Bet v 2 березы повислой

Цель исследования. Получение иммунологически активного рекомбинантного белка-аллергена Bet v 2 пыльцы березы. Материалы и методы. Из образца пыльцы березы была выделена мрНК. С помощью методики SMART была получена библиотека кДНК. С помощью ПЦр с праймерами с кДНК амплифицировали ген Bet v 2. Полученный ПЦр-фрагмент гена был клонирован в вектор pET-29b(+). рекомбинантный белок Bet v 2 был экспрессирован в клетках E. coli, трансформированных плазмидой. рекомбинантный белок очищали с использованием Ni-NTA агарозы. Иммунологическую активность рекомбинантного белка Bet v 2 определяли с помощью ИФА и иммуноблота. Результаты. Б ходе работы была создана система по наработке препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов. На первом этапе из пыльцы березы, собранной на территории РФ, был клонирован ген аллергена Bet v 2. Ген был включен в вектор pET29(+) для экспрессии в бактериальных клетках. С данной плазмидой был получен экспрессионный штамм клеток E. coli. Б бактериальных клетках активировался синтез рекомбинантного белка, который накапливался в тельцах включения. Была разработана методика выделения рекомбинантного белка Bet v 2 из телец включения с помощью одного раунда хроматографической очистки. Быделение рекомбинантного белка проводили с помощью хроматографии на Ni-агарозе. Б результате был получен высокоочищенный препарат рекомбинантного аллергена. Б ИФА узнавание рекомбинантного белка Bet v 2 сыворотками различалось, что говорит о разной степени сенсибилизации пациентов к данному аллергену. Б иммуноблот-тесте препарат был активен только в 15% случаев. По всей видимости, активные эпитопы данного аллергена в основном конформационные и активны в тесте ИФА, тогда как линейные эпитопы, активные в иммуноблоте, составляют малую часть. Заключение. Создана система для наработки препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов.

аллерген пыльцы, береза повислая, профилин, методика очистки