МИРНК СПЕЦИФИЧЕСКИ ПОДАВЛЯЮТ ПРОДУКЦИЮ ИНТЕРЛЕЙКИНА-13 IN VITRO

Цель работы. Согласно современным представлениям, одним из основных медиаторов, вовлеченных в развитие аллергического процесса, является IL-13. Целью данной работы было сконструировать молекулы малых интерферирующих РНК для эффективного подавления экспрессии гена il-13 мыши в экспериментах in vitro. Материалы и методы. Для экспрессии IL-13 в условиях in vitro кодирующая последовательность гена il-13 была амплифицирована с использованием кДНК ConA-стимулированных клеток селезенки мышей BALB/c в качестве матрицы и клонирована в экспрессионный вектор pUCHR IRES GFP. Методами компьютерного анализа были спроектированы шесть вариантов siRNA, направленных против мРНК-il-13. Для тестирования эффективности siRNA осуществляли ко-трансфекцию 1х 10 5 клеток HEK293T смесью (0,5 мкг плазмиды и 1 мкг siRNA) с помощью реагента Lipofectamine 2000. Сутки спустя изменения экспрессии гена il-13 фиксировали методом проточной цитометрии по интенсивности флуоресценции GFP+-клеток. Экспрессию гена il-13 на уровне мРНК оценивали методом количественной ПЦР, а на уровне белкового продукта — методом твердофазного ИФА. Результаты. Удалось получить молекулы миРНК, три из которых эффективно подавляли экспрессию гена il-13. Заключение. Таким образом, варианты миРНК, эффективно подавляющие продукцию IL-13 мыши in vitro, в дальнейшем могут быть использованы в экспериментах in vivo как для понимания роли IL-13 в патогенезе аллергических состояний, так и для разработки новых подходов к терапии.

аллергия, интерлейкин-13, подавление экспрессии гена il-13, миРНК, механизм интерференции РНК