Моделирование окислительного стресса в лимфоцитах крови in vitro для изучения апоптоза опухолевых клеток линии Jurkat
- Авторы: Рязанцева Н.В.1, Степовая Е.А.1, Коновалова Е.В.1, Носарева О.Л.1, Наумова А.И.1, Орлов Д.С.1, Веснина О.Н.1, Новицкий В.В.1
-
Учреждения:
- Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
- Выпуск: Том 94, № 5 (2013)
- Страницы: 736-740
- Тип: Актуальные проблемы биохимии и лабораторной диагностики
- URL: https://journals.rcsi.science/kazanmedj/article/view/1932
- DOI: https://doi.org/10.17816/KMJ1932
- ID: 1932
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Экспериментальный подбор оптимальной концентрации водорода пероксида, способной эффективно индуцировать развитие окислительного стресса и запуск программированной гибели максимального количества лимфоцитов крови, но не их элиминацию по пути некроза. Методы. Объектом исследования служила опухолевая клеточная линия Jurkat (Т-лимфобластный лейкоз человека), и лимфоциты, выделенные из крови здоровых доноров (15 мужчин и 18 женщин) в возрасте от 18 до 25 лет. Для подтверждения объекта исследования (лимфоциты крови) использовали типирование изучаемых клеток по CD5 при помощи метода проточной цитофлуориметрии. Для моделирования окислительного стресса in vitro лимфоциты крови инкубировали в присутствии водорода пероксида в конечной концентрации 0,3; 0,5; 1,0 и 2,0 мМ. Оценивали содержание восстановленного и окисленного глутатиона, соотношение между этими фракциями, а также уровень активных форм кислорода в лимфоцитах крови для сравнительной оценки степени окислительного стресса с опухолевыми клетками. Результаты. Установлена оптимальная конечная концентрация водорода пероксида - 0,5 мМ. При ней зарегистрированы нарастание концентрации активных форм кислорода в клетке, сопоставимое с уровнем в опухолевых клетках, образование максимального количества аннексин-положительных клеток и минимальное пропидий-положительных, сопоставимое значение соотношения восстановленного глутатиона к окисленному. ВЫВОД. Подобрана оптимальная концентрация водорода пероксида (0,5 мМ) для формирования окислительного стресса в лимфоцитах крови с целью изучения дизрегуляции апоптоза при окислительном стрессе в опухолевых клетках линии Jurkat (Т-лимфобластный лейкоз человека).
Ключевые слова
Полный текст
Открыть статью на сайте журналаОб авторах
Наталья Владимировна Рязанцева
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Елена Алексеевна Степовая
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Елена Валерьевна Коновалова
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Ольга Леонидовна Носарева
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Email: olnosareva@yandex.ru
Анастасия Ивановна Наумова
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Дмитрий Сергеевич Орлов
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Оксана Николаевна Веснина
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Вячеслав Викторович Новицкий
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Список литературы
- Архипов С.А., Шкурупий В.А., Зайковская М.В. и др. Разноправленные эффекты Н2О2 на макрофаги и фибробласты в условиях моделирования окислительного стресса // Современ. наукоёмк. технол. - 2010. - №8. - С. 76-77.
- Дубинина Е.Е., Пустыгина А.В. Окислительная модификация протеинов, её роль при патологических состояниях // Украин. биохим. ж. - 2008. - Т. 80, №6. - С. 5-18.
- Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Глутатион ядра клетки и его функции // Вопр. биол., мед. и фармацевт. хим. - 2010. - №5. - С. 3-5.
- Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З. и др. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания. - Новосибирск: АРТА, 2008. - 284 с.
- Октябрьский О.Н., Смирнова Г.В. Редокс-регуляция клеточных функций // Биохимия. - 2007. - Т. 72, вып. 2. - С. 158-174.
- Рязанцева Н.В., Жаворонок Т.В., Степовая Е.А. и др. Окислительный стресс в модуляции апоптоза нейтрофилов в патогенезе острых воспалительных заболеваний // Бюлл. СО РАМН. - 2010. - Т. 30, №5. - С. 58-63.
- Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Кайгородова Е.В. и др. Митоген-активированные протеинкиназы JNK и р38 являются редокс-зависимыми молекулярными мишенями нарушения апоптоза при окислительном стрессе // Успехи физиол. наук. - 2009. - Т. 40, №2. - С. 3-11.
- Чиссова В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2011 г. (заболеваемость и смертность). - Москва: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2013. - 289 с.
- Aslan M., Canatan D. Modulation of redox pathways in neutrophils from sickle cell disease patients // Exp. Hematol. - 2008. - Vol. 36,N 11. - Р. 1535-1544.
- Bignold L.P., Ferrante A. Mechanism of separation of polymorphonuclear leukocytes from whole blood by the one-step Hypaque-Ficoll method // J. Immunol. Methods. - 1987. - Vol. 96,N 1. - P. 29-33.
- Cui J., Wang Q., Wang J. et al. Basal c-Jun NH2-terminal protein kinase activity is essential for survival and proliferation of T-cell acute lymphoblastic leukemia cells // Mol. Cancer Ther. - 2009. - Vol. 8, N 12. - Р. 3214-3222.
- Gibot L., Follet J., Metges J.P. et al. Human caspase 7 is positively controlled by SREBP-1 and SREBP-2 // Biochem. J. - 2009. - Vol. 27,N 3. - P. 473-483.
- Negroni L., Samson M., Guigonis J.M. et al. Treatment of colon cancer cells using the cytosine deaminase/5-fluorocytosine suicide system induces apoptosis, modulation of the proteome, and Hsp90beta phosphorylation // Mol. Cancer Ther. - 2007. - Vol. 10. - P. 2747-2756.
- Ulmer A.J., Flad H.D. Discontinuous density gradient separation of human mononuclear leukocytes using Percoll as gradient medium // J. Immunol. Methods. - 1979. - Vol. 30,N 1. - P. 1-10.
- Valko M., Rhodes C.J., Moncol J. et al. Free radicals, metals and antioxidants in oxidative stressinduced cancer // Chem. Biol. Interact. - 2006. - Vol. 160. - P. 1-40.
