Анализ ДНК-метабаркодирования грибного сообщества древесины винограда на территории Краснодарского края и Крыма

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Виноград — экономически важное сельскохозяйственное растение, поэтому исследования микробиоты растений и ризосферы виноградников становятся все более актуальными в последнее десятилетие. Важность таких исследований также в том, что виноград является многолетней долгоиспользуемой культурой.

В настоящем исследовании представлены результаты анализа метабаркодирования ДНК грибного сообщества образцов древесины винограда, отобранных из виноградных насаждений Краснодарского края и Южного берега Крыма, а также рассмотрены подходы к анализу данных ДНК-метабаркодирования. Наиболее информативным классификатором метагеномных данных оказался основанный на машинном обучении Naïve base («sklearn») по сравнению с выравниванием BLAST+ и глобальным выравниванием Vsearch. Наибольшее количество таксонов удалось выявить, анализируя локусы ITS, что подтвердилось на всех используемых в работе типах классификаторов. Помимо количества таксонов, праймеры на локус ITS показали высокую специфичность в отношении ДНК грибов, в сравнении с локусами LSU и SSU. Наиболее распространенными из выявленных представителей царства грибов оказались рода: Acidea, Alternaria, Cladosporium и Fusarium. Установлены достоверные различия при оценке альфа- и бета-разнообразия при анализе образцов из разных регионов. В настоящей статье представлен анализ грибного сообщества исследуемых виноградников, а также подходы к классификации ASV. Это исследование стало первым, описывающим эндофитные грибные сообщества виноградной лозы Краснодарского края и полуострова Крым с использованием анализа данных ДНК-метабаркодирования.

Об авторах

София Алексеевна Блинова

Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии; ООО «Синтол»

Автор, ответственный за переписку.
Email: sofya.blinova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-6782-8353
SPIN-код: 9148-3765
Scopus Author ID: 57217069755

аспирант, мл. научн. сотр.

Россия, Москва; Москва

Алексей Анатольевич Шварцев

ООО «Синтол»

Email: alexey.sva@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2786-9860
SPIN-код: 9792-6398

научн. сотр.

Россия, Москва

Яков Игоревич Алексеев

ООО «Синтол»; Всероссийский национальный научно-исследовательский институт виноградарства и виноделия «Магарач» Российской академии наук

Email: jalex01@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1696-7684
SPIN-код: 8145-5586

канд. биол. наук, директор по науке

Россия, Москва; Ялта

Елена Павловна Странишевская

Всероссийский национальный научно-исследовательский институт виноградарства и виноделия «Магарач» Российской академии наук

Email: stranishevskayaelena@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-2840-5638
Scopus Author ID: 57190218360

д-р с.-х. наук, профессор, заведующая лабораторией

Россия, Ялта

Елена Тарасовна Ильницкая

Северо-Кавказский федеральный научный центр садоводства, виноградарства, виноделия

Email: ilnitskaya79@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2446-0971
SPIN-код: 7075-1328
Scopus Author ID: 57192072976

канд. биол. наук, заведующая лабораторией

Россия, Краснодар

Марина Викторовна Макаркина

Северо-Кавказский федеральный научный центр садоводства, виноградарства, виноделия

Email: konec_citatu@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3397-0666
SPIN-код: 3833-1636
Scopus Author ID: 57204108200

мл. научн. сотр.

Россия, Краснодар

Александр Александрович Соловьев

Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии

Email: a.soloviev70@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-4480-8776
SPIN-код: 3431-5168
Scopus Author ID: 35732425900

д-р биол. наук, профессор РАН, заведующий лабораторией

Россия, Москва

Список литературы

  1. Jayawardena R.S., Purahong W., Zhang W., et al. Biodiversity of fungi on Vitis vinifera L. revealed by traditional and high-resolution culture-independent approaches // Fungal Divers. 2018. Vol. 90. P. 1–84. doi: 10.1007/s13225-018-0398-4
  2. Fuchs M. Grapevine viruses: a multitude of diverse species with simple but overall poorly adopted management solutions in the vineyard // J Plant Pathol. 2020. Vol. 102, No. 3. P. 643–653. doi: 10.1007/s42161-020-00579-2
  3. Salvetti E., Campanaro S., Campedelli I., et al. Whole-Metagenome-Sequencing-Based Community Profiles of Vitis vinifera L. cv. Corvina Berries Withered in Two Post-harvest Conditions // Front Microbiol. 2016. Vol. 7. ID937. doi: 10.3389/fmicb.2016.00937
  4. Mori N., Quaglino F., Tessari F., et al. Investigation on ‘bois noir’ epidemiology in north-eastern Italian vineyards through a multidisciplinary approach // Ann Appl Biol. 2014. Vol. 166, No. 1. P. 75–89. doi: 10.1111/aab.12165
  5. Буровинская М.В., Юрченко Ю.Г. Трахеомикозные заболевания винограда и меры их ограничения // Плодоводство и виноградарство Юга России. 2020. № 63. С. 270–284. doi: 10.30679/2219-5335-2020-3-63-270-284
  6. Савчук Н.В., Юрченко Е.Г., Виноградова С.В., Поротикова Е.В. Способы проникновения инфекции возбудителей фузариозного усыхания генеративных органов винограда // Материалы V Международной научно-практической конференции «Современное состояние, проблемы и перспективы развития аграрной науки»; Сентябрь 21–25, 2020. С. 95–97. doi: 10.33952/2542-0720-2020-5-9-10-45
  7. Blackwell M. The Fungi: 1, 2, 3 … 5.1 million species? // Am J Bot. 2011. Vol. 98, No. 3. P. 426–438. doi: 10.3732/ajb.1000298
  8. Berlanas C., Berbegal M., Elena G., et al. The Fungal and Bacterial Rhizosphere Microbiome Associated With Grapevine Rootstock Genotypes in Mature and Young Vineyards // Front Microbiol. 2019. Vol. 10. ID1142. doi: 10.3389/fmicb.2019.01142
  9. Úrbez-Torres J.R., Gubler W.D. Susceptibility of grapevine pruning wounds to infection by Lasiodiplodia theobromae and Neofusicoccum parvum // Plant Pathol. 2010. Vol. 60, No. 2. P. 261–270. doi: 10.1111/j.1365-3059.2010.02381.x
  10. Jayawardena R., Purahong W., Zhang W., et al. Biodiversity of fungi on Vitis vinifera L. revealed by traditional and high-resolution culture-independent approaches // Fungal Divers. 2018. Vol. 90, No. 1. P. 1–84. doi: 10.1007/s13225-018-0398-4
  11. Lade S.B., Štraus D., Oliva J. Variation in Fungal Community in Grapevine (Vitis vinifera) Nursery Stock Depends on Nursery, Variety and Rootstock // Journal of Fungi. 2022. Vol. 8, No. 1. ID 47. doi: 10.3390/jof8010047
  12. Mendes R., Kruijt M., De Bruijn I., et al. Deciphering the Rhizosphere Microbiome for Disease-Suppressive Bacteria // Science. 2011. Vol. 332, No. 6033. P. 1097–1100. doi: 10.1126/science.1203980
  13. Janssen P.H. Identifying the Dominant Soil Bacterial Taxa in Libraries of 16S rRNA and 16S rRNA Genes // Appl Environ Microbiol. 2006. Vol. 72, No. 3. P. 1719–1728. doi: 10.1128/aem.72.3.1719-1728.2006
  14. Buffet-Bataillon S., Rizk G., Cattoir V., et al. Efficient and Quality-Optimized Metagenomic Pipeline Designed for Taxonomic Classification in Routine Microbiological Clinical Tests // Microorganisms. 2022. Vol. 10, No. 4. ID 711. doi: 10.3390/microorganisms10040711
  15. Zarraonaindia I., Owens S.M., Weisenhorn P., et al. The Soil Microbiome Influences Grapevine-Associated Microbiota // mBio. 2015. Vol. 6, No. 2. ID e02527–14. doi: 10.1128/mbio.02527-14
  16. Niem J.M., Billones-Baaijens R., Stodart B., Savocchia S. Diversity Profiling of Grapevine Microbial Endosphere and Antagonistic Potential of Endophytic Pseudomonas Against Grapevine Trunk Diseases // Front Microbiol. 2020. Vol. 11. ID 477. doi: 10.3389/fmicb.2020.00477
  17. Schoch C.L., Seifert K.A., Huhndorf S., et al. Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi // PNAS. 2012. Vol. 109, No. 16. P. 6241–6246. doi: 10.1073/pnas.1117018109
  18. Ishii N., Ishida S., Kagami M. PCR primers for assessing community structure of aquatic fungi including Chytridiomycota and Cryptomycota // Fungal Ecol. 2015. Vol. 13. P. 33–43. doi: 10.1016/j.funeco.2014.08.004
  19. Jones E.B.G., Devadatha B., Abdel-Wahab M.A., et al. Phylogeny of new marine Dothideomycetes and Sordariomycetes from mangroves and deep-sea sediments // Botanica Marina. 2020. Vol. 63, No. 2. P. 155–181. doi: 10.1515/bot-2019-0014
  20. Tedersoo L., Anslan S., Bahram M., et al. Shotgun metagenomes and multiple primer pair-barcode combinations of amplicons reveal biases in metabarcoding analyses of fungi // MycoKeys. 2015. Vol. 10. P. 1–43. doi: 10.3897/mycokeys.10.4852
  21. Bioinformatics.babraham.ac.uk [Интернет]. Babraham Bioinformatics [дата обращения: 11.12.2021]. Доступ по ссылке: https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/
  22. Multiqc.info [Интернет]. MultiQC [дата обращения: 11.12.2021]. Доступ по ссылке: https://www.multiqc.info/
  23. Bolger A.M., Lohse M., Usadel B. Trimmomatic: a flexible trimmer for Illumina sequence data // Bioinformatics. 2014. Vol. 30, No. 15. P. 2114–2120. doi: 10.1093/bioinformatics/btu170
  24. Bolyen E., Rideout J.R., Dillon M.R., et al. Reproducible, interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME2 // Nat Biotechnol. 2019. Vol. 37, No. 8. P. 852–857. doi: 10.1038/s41587-019-0209-9
  25. Callahan B.J., McMurdie P.J., Rosen M.J., et al. DADA2: High-resolution sample inference from Illumina amplicon data // Nat Methods. 2016. Vol. 13, No. 7. P. 581–583. doi: 10.1038/nmeth.3869
  26. Camacho C., Coulouris G., Avagyan V., et al. BLAST+: architecture and applications // BMC Bioinformatics. 2009. Vol. 10, No. 1. ID 421. doi: 10.1186/1471-2105-10-421
  27. Rognes T., Flouri T., Nichols B., et al. VSEARCH: a versatile open source tool for metagenomics // PeerJ. 2016. Vol. 4. ID e2584. doi: 10.7717/peerj.2584
  28. Pedregosa F., Varoquaux G., Gramfort A., et al. Scikit-learn: Machine Learning in Python // J Mach Learn Res. 2012. Vol. 12. P. 2825–2830. doi: 10.48550/arXiv.1201.0490
  29. Nilsson R.H., Larsson K.-H., Taylor A.F.S., et al. The UNITE database for molecular identification of fungi: handling dark taxa and parallel taxonomic classifications // Nucleic Acids Res. 2018. Vol. 47, No. D1. P. D259–D264. doi: 10.1093/nar/gky1022
  30. Robeson M.S. II, O’Rourke D.R., Kaehler B.D., et al. RESCRIPt: Reproducible sequence taxonomy reference database management for the masses // bioRxiv. 2020. ID 326504. doi: 10.1101/2020.10.05.326504
  31. McMurdie P.J., Holmes S. phyloseq: An R Package for Reproducible Interactive Analysis and Graphics of Microbiome Census Data // PLoS One. 2013. Vol. 8, No. 4. ID e61217. doi: 10.1371/journal.pone.0061217
  32. Wickham H. ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. In: Gentleman R., Hornik K., Parmigiani G., editors. Use R! New York: Springer-Verlag, 2016. P. 189–201. doi: 10.1007/978-3-319-24277-4_9
  33. González V., Tello M.L. The endophytic mycota associated with Vitis vinifera in central Spain // Fungal Divers. 2010. Vol. 47, No. 1. P. 29–42. doi: 10.1007/s13225-010-0073-x
  34. Aćimović S.G., Harmon C.L., Bec S., et al. First Report of Diplodia corticola Causing Decline of Red Oak (Quercus rubra) Trees in Maine // Plant Dis. 2016. Vol. 100, No. 3. ID649. doi: 10.1094/pdis-09-15-0994-pdn
  35. Phillips A.J.L., Alves A., Abdollahzadeh J., et al. The Botryosphaeriaceae: genera and species known from culture // Stud Mycol. 2013. Vol. 76, No. 1. P. 51–167. doi: 10.3114/sim0021

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Анализ классификации ASV разных локусов методом, основанным на машинном обучении («sklearn») по рангу таксономии надцарство: a — SSU; b — LSU; c — ITS

Скачать (342KB)
3. Рис. 2. Диаграмма размаха разнообразия внутри популяций по регионам сбора образцов при анализе локуса ITS грибов

Скачать (174KB)
4. Рис. 3. Уровень сходства сообществ грибов Краснодарского края и Крыма, показанный с помощью метода многомерного неметрического масштабирования, основанного на расстоянии Жаккара, отражающий бета-разнообразие. Стрелками обозначены образцы, выпадающие из общего массива распределения

Скачать (128KB)
5. Рис. 4. Уровень бета-разнообразия сообществ грибов Краснодарского края и Крыма, показанный с помощью метода анализа главных координат, основанного на метриках взвешенного и невзвешенного UniFrac

Скачать (151KB)
6. Рис. 5. График распределения родов грибов 50 наиболее представленных ASV по местам сбора образцов

Скачать (162KB)
7. Рис. 6. Соотношение наиболее распространенных родов грибов

Скачать (327KB)

© ООО "Эко-Вектор", 2022


 


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах