Анализ экспрессии PD1 на CD3⁺ лимфоцитах крови крысы, стимулированных антителами к CD3, методом проточной цитометрии

Исследование PD-1/PD-L сигнального пути в регуляции иммунного ответа является фокусом исследований в настоящее время. Показана ключевая роль PD-1 молекулы в регуляции аутоиммунных, противоопухолевых и противовирусных реакций. Культура лимфоцитов крыс и мышей, а также экспериментальные модели иммунопатологий на животных широко используются в исследованиях. Однако лимфоциты крыс почти не используют для изучения PD-1/PD-L пути. Нет данных о экспрессии PD-1 или ее индукции в лимфоцитах крыс. В культуре Т-лимфоцитов человека экспрессию PD-1 можно индуцировать с помощью сорбированных в лунках планшета антител к CD3 клона NIB1412. В настоящем исследовании мы выясняли влияние антител к CD3 крысы клона G4.18 на экспрессию PD-1 в культуре лимфоцитов периферической крови интактных крыс Wistar. По некоторым данным литературы антитела к CD3 клона G4.18 в иммобилизованном виде могут активировать изолированные Т-клетки крыс, а по другим, ингибируют аллогенные реакции в смешанной культуре лимфоцитов, блокируют цитотоксичность клеток, полученных от крыс с развившейся реакцией отторжения трансплантата. Мы обнаружили, что инкубация лимфоцитов крови крыс с иммобилизованными на пластике антителами к CD3 клона G4.18 приводит к изменению морфологии клеток и индукции PD-1 на CD3+ лимфоцитах. После инкубации с антителами к CD3 доля PD-1+ лимфоцитов среди CD3+ лимфоцитов составила 12,05±6,04 %, что достоверно больше, чем доли таких клеток до инкубации и при инкубации в питательной среде, составившие 2,60±2,62 % и 4,59±5,81 %, соответственно. На графиках дот-плот, показывающих распределение клеток по параметрам прямого и бокового светорассеяния, PD-1+CD3+ лимфоциты, индуцированные антителами к CD3, локализованы в области относительно меньшей величины прямого светорассеяния и большей величины бокового светорассеяния. Возможно, данные клетки относятся к клеткам, вступившим в апоптоз.