Влияние бетаэндорфина и динорфина А на апоптоз лимфоцитов периферической крови человека in vitro

Наряду с функционированием в ткани нервной системы эндогенные опиоидные пептиды – агонисты мю-, дельта- и каппа-опиоидных рецепторов – оказывают разнообразное регулирующее влияние на клетки иммунной системы. Кроме того, существуют экспериментальные доказательства того, что экзогенный агонист мю-опиоидных рецепторов – морфин – оказывает влияние на жизнеспособность клеток иммунной системы. Данные эффекты обнаружены в экспериментах как с клеточными культурами, так и на лабораторных животных. Поэтому мы исследовали влияние эндогенных опиатов – динорфина А и бета-эндорфина – на жизнеспособность мононуклеаров периферической крови человека. В наших экспериментах была использована периферическая венозная кровь 14 условно здоровых добровольцев, каждый из которых перед забором биоматериала подписывал информированное согласие и имел возможность задать все интересующие его вопросы. Мононуклеарные клетки получали из гепаринизированной венозной крови методом разделения на градиенте плотности по стандартной методике. Для оценки пролиферации мононуклеары культивировали во влажной атмосфере в течение 72 часов. За 18 часов до окончания культивирования в каждую лунку вносили по 2 мкКи ³H-метилтимидина. Радиоактивность проб определяли на жидкостном сцинтилляционном счетчике “Guardian” (Wallac, Финляндия) и выражали в имп/мин. Для оценки развития апоптоза клетки культивировали в течение суток в тех же условиях, за исключением добавления радиоактивной метки. Затем клетки окрашивали с помощью реагентов Annexin V-FITC/7-AAD kit (Beckman Coulter, США) согласно инструкции производителя и регистрировали апоптоз лимфоцитов методом проточной цитометрии. Исследование апоптоза клеток проводили на проточных цитофлюориметрах BD FACSCalibur (Becton Dickinson, США) или CytoFLEX S (Beckman Coulter, США). Гейт лимфоцитов (гейтировали по параметрам прямого и бокового светорассеяния) отображали на гистограмме Annexin V-FITC/7-AAD и подсчитывали долю (в процентах) живых клеток, связывающих аннексин (Annexin V-FITC⁺/7-AAD-). Статистическую обработку результатов проводили с использованием парного t-критерия Стьюдента. Было установлено, что агонисты мю- и каппа-опиоидных рецепторов бета-эндорфин и динорфин соответственно в физиологических концентрациях (10^-10М и 10^-8М) оказывают разнонаправленное влияние на пролиферацию мононуклеарных клеток периферической крови человека. Так, динорфин А стимулирует спонтанную пролиферацию и пролиферацию, вызванную субоптимальным воздействием митогена. Бета-эндорфин усиливает эффект субоптимальной концентрации митогена и значительно угнетает пролиферацию при максимальной активации клеток. Модулирующие эффекты бета-эндорфина и динорфина А in vitro на пролиферацию не связаны с усилением гибели клеток путем апоптоза.